轉(zhuǎn)化生長因子β1、波形蛋白和結(jié)蛋白在糖尿病大鼠腎組織中表達(dá)的研究.pdf

1、近年來,腎小管-間質(zhì)病變在纖維化腎臟疾病的慢性進展過程中的作用越來越此起關(guān)注.研究證明,腎小管間質(zhì)中的間質(zhì)細(xì)胞,尤其是成纖維細(xì)胞,在腎間質(zhì)纖維化中起關(guān)鍵作用.近幾年的研究又進一步認(rèn)為,腎間質(zhì)的成纖維細(xì)胞不僅來源于其自身的增殖,部分可能由腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來.與該過程相并行的是腎臟致纖維化因子-轉(zhuǎn)化生長因子-β<,1>(TGF-β<,1>)在腎臟局部持續(xù)、過度的表達(dá),而且,TGF-β<,1>除了能促進成纖維細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞增殖外,還能誘導(dǎo)

2、腎小管上皮細(xì)胞向腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化.然而,在糖尿病腎組織,尤其在腎纖維化的進展過程中是否存在類似的表型轉(zhuǎn)化目前尚無定論.為更好地揭示在DN纖維化進展過程中腎間質(zhì)-小管病變的機制及其與TGF-β<,1>之間的相互關(guān)系,該實驗利用鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型,觀察在模型建立后的不同觀察時點TGF-β<,1>和波形蛋白(Vimentin)、結(jié)蛋白(Desmin)的mRNA在大鼠腎皮質(zhì)中的表達(dá),探討

3、糖尿病大鼠不同階段TGF-β<,1>、Vimentin和Desmin在大鼠腎皮質(zhì)中表達(dá)的變化規(guī)律及其相互關(guān)系.方法87只清潔級雄性SD大鼠,體重180~200g,隨機分為糖尿病組(DM組,N=49)和對照組(NC組,n=38)兩大組.分籠顆粒飼料喂養(yǎng),隨意飲水.DM組給予一次性腹腔內(nèi)注射1.0﹪STZ(streptozotocin,鏈脲佐菌素,購自Sigma公司)70mg/kg,STZ溶于檸檬酸緩沖液中(pH=4.2),NC組腹腔注射等

4、容量的檸檬酸緩沖液.注射STZ后48小時和72小時,分別測血糖大于16.7mmol/l(300mg/dL)且尿糖持續(xù)3天+++以上的大鼠視為糖尿病大鼠,并在整個實驗周期內(nèi)該標(biāo)準(zhǔn)不變.分別于造模成功后第3天、第7天、第14天、第30天、第60天和第90天每組各隨機取6只大鼠,用股動脈放血法處死;收集股動脈血用于測定血糖、血肌酐等.取樣前稱大鼠體重,收集尿用于測定尿白蛋白與尿肌酐.處死后,立即取出雙側(cè)腎臟稱重,去包膜的右側(cè)腎臟放入凍存管,置

5、液氮中,后以-80℃冰箱保存?zhèn)溆?液氮下研磨組織,Trizol液提取大鼠腎皮質(zhì)總RNA,用RT-PCR法半定量檢測在不同觀察時點糖尿病大鼠腎皮質(zhì)中TGF-β<,1>和Vimentin、Desmin、mRNA的表達(dá)水平.四、結(jié)論1.STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎皮質(zhì)中TGF-β<,1>和Vimentin mRNA表達(dá)隨病程推移逐漸增多、Desmin mRNA的表達(dá)隨病程推移卻逐漸減少,且TGF-β<,1> mRNA表達(dá)的顯著增多早于Viment

6、in和Desmin mRNA的表達(dá)的改變.2.糖尿病大鼠腎皮質(zhì)Desmin、mRNA與TGF-β<,1>、Vimentin mRNA的表達(dá)均呈顯著負(fù)相關(guān);Vimentin mRNA的表達(dá)與TGF-β<,1>的mRNA的表達(dá)呈顯著正相關(guān);糖尿病大鼠腎皮質(zhì)TGF-β<,1> mRNA和Vimentin mRNA的表達(dá)與腎重值呈顯著正相關(guān),Desmin的mRNA表達(dá)與腎重值呈顯著負(fù)相關(guān).3.經(jīng)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎皮質(zhì)中可能存在部分腎小管上