氧化應(yīng)激、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和巢蛋白表達(dá)變化在甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠腎損害中的作用.pdf

1、目的：通過測(cè)定過氧化氫酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量在甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠腎組織中的改變，了解氧化應(yīng)激在甲亢性腎損傷中的作用：并通過對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor -β1，TGF-β1)、足

2、細(xì)胞骨架蛋白巢蛋白(Nestin)在甲亢模型大鼠腎組織中表達(dá)變化的觀察，來探討甲狀腺功能與腎臟損傷的關(guān)系，進(jìn)一步了解甲亢性腎損傷的特點(diǎn)及發(fā)病機(jī)制。 方法：本試驗(yàn)通過L-T4(優(yōu)甲樂)灌胃法(50μg·1 00g-1·d-1)制作甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠模型(HT組)，飼養(yǎng)同時(shí)同量生理鹽水灌胃大鼠作為對(duì)照組(A組)。觀察連續(xù)灌胃25天(A1及HT1組)、45天(A2及HT2組)、60天(A3及HT3組)大鼠一般情況、甲狀腺功能、腎功能及

3、腎組織形態(tài)學(xué)的改變；應(yīng)用組織勻漿測(cè)定腎臟中各種抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)，活性及氧化產(chǎn)物(MDA)含量的改變情況；并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腎組織中TGF-β1、Nestin在腎組織中的表達(dá)；同時(shí)檢測(cè)24h尿蛋白排泄情況。 結(jié)果：1 一般情況對(duì)照大鼠飲食水情況、外觀、精神狀態(tài)及日常活動(dòng)較灌胃前無明顯變化，并且對(duì)照大鼠平均體重穩(wěn)定增加。甲亢大鼠飲食、飲水較對(duì)照組明顯增加；大便呈糊狀，并含有不消化食物；毛色無光澤，大部

4、分出現(xiàn)嚴(yán)重的脫毛現(xiàn)象；活動(dòng)增加、驚恐躁動(dòng)、易受激惹及肌肉細(xì)微震顫；并且體重較同期對(duì)照組減輕(p＜0.05)，而腎重/體重與同期對(duì)照組相比顯著增加(p＜0.01)。 2 甲狀腺功能檢查甲亢組在25、45、60天時(shí)，F(xiàn)T3及FT4均較同期對(duì)照組顯著增高(P＜0.01)，TSH較同期對(duì)照組顯著降低(P＜0.01)；甲亢三組間甲功水平亦存在顯著差異，隨著優(yōu)甲樂作用時(shí)間的延長(zhǎng)，F(xiàn)T3、FT4進(jìn)行性增加而TSH進(jìn)行性減低(P＜0.01)。

5、3.血肌酐、24h尿蛋白定量改變甲亢組血肌酐在25天及45天時(shí)與同期對(duì)照組相比無明顯差異(P＞0.05)。在60天時(shí)，甲亢組Scr比同期對(duì)照組顯著增高(P＜0.05)，亦顯著高于HT1組及HT2組(P＜0.05)。 甲亢組在25天時(shí)24h尿蛋白定量較同期對(duì)照組增高(P＞0.05)。在45天和60天時(shí)24h尿蛋白定量均較同期對(duì)照組顯著增高(P＜0.01)。甲亢三組間相比其24h尿蛋白定量也存在顯著差異(P值均小于0.01)。

6、 4 腎組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)甲亢組CAT、GSH-Px、SOD活性均較同期對(duì)照組顯著降低(P＜0.01)。甲亢三組間抗氧化酶指標(biāo)亦存在顯著差異，隨病程延長(zhǎng)各酶活性進(jìn)行性降低。HT3組CAT、SOD活性較HTl及HT2組均顯著降低(P＜0.01)；HT3組GSH-Px活性較HT1及HT2組亦顯著降低(P值分別小于0.01及0.05)。HT2組大鼠GSH-Px、SOD活性較HT1組顯著降低(P＜0.01)，HT2組CAT活力較HT1組亦顯著

7、降低(P＜0.05)。 甲亢組MDA含量均較同期對(duì)照組顯著增加(P＜0.01)。 三組間MDA亦存在顯著差異(P＜0.01)，隨病程延長(zhǎng)MDA含量進(jìn)行性增加。 5 病理改變透射電鏡：正常組大鼠腎小球足細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，足突排列整齊清晰。甲亢組大鼠腎小球基底膜厚度不均勻增加；足細(xì)胞足突局灶性融合，有的甚至消失；毛細(xì)血管內(nèi)皮窗孔徑增大；足細(xì)胞線粒體峭部分或大部分融合或消失，部分膜融合或消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有脫顆粒相象；系膜細(xì)胞和內(nèi)皮

8、細(xì)胞增生腫脹，系膜基質(zhì)增多；并且這些病變隨著甲亢病情的加重而加重。 6 免疫組化結(jié)果TGF-β1結(jié)果：對(duì)照組TGF-β1的表達(dá)較少，陽(yáng)性染色物主要位于胞漿；甲亢組在腎小球和腎小管均有TGF-β1蛋白表達(dá)增多，隨著甲亢病程的進(jìn)展，TGF-β1表達(dá)呈遞增趨勢(shì)。甲亢組與同期對(duì)照組相比，在25天時(shí)TGF-β1陽(yáng)性面積百分率顯著增加(P＜0.05)，在45天和60天時(shí)陽(yáng)性面積百分率增加的更明顯(P＜0.01)。甲亢三組間亦存在顯著差異，H

9、T3組較H1及HT2組均顯著增加(P＜0.01，P＜0.05)； HT2組較HT1組亦顯著增加(P＜0.05)。 Nestin結(jié)果：甲亢組與同期對(duì)照組相比，在25天時(shí)Nestin陽(yáng)性面積百分率稍減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，在45天和60天時(shí)顯著減少(P＜0.05，P＜0.01)。甲亢三組間亦存在差異，HT2及HT3組較HTl組均顯著減少(P＜0.01)；HT2組與HT3組無顯著差異(P＞0.05)。 7 甲狀腺

10、功能、組織勻漿指標(biāo)、TGF-β1及Nestin之間相關(guān)性的分析結(jié)果CAT、GSH-Px、SOD活性與FT3、FT4呈負(fù)相關(guān)，與TSH呈正相關(guān)；MDA含量與FT3、FT4呈正相關(guān)，與TSH呈負(fù)相關(guān)。TGF-β1的表達(dá)與FT3、FT4呈正相關(guān)，與TSH呈負(fù)相關(guān)；與抗氧化酶活性呈負(fù)相關(guān)，與MDA含量呈正相關(guān)。Nestin與FT3、FT4呈負(fù)相關(guān)，與TSH呈正相關(guān)；與CAT、GSH-Px、SOD呈正相關(guān)，與MDA含量負(fù)相關(guān)。24h尿蛋白定量與F

11、T3、FT4正相關(guān)，與TSH負(fù)相關(guān)；與TGF-β1正相關(guān)；與Nestin負(fù)相關(guān)。 結(jié)論：本試驗(yàn)通過L-T4(優(yōu)甲樂)灌胃法制作甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠模型，甲亢組大鼠表現(xiàn)出的癥狀、體征及甲狀腺功能檢查均符合甲亢的特點(diǎn)。隨著甲亢病程的進(jìn)展出現(xiàn)腎臟損傷，表現(xiàn)為腎臟肥大、血肌酐的升高、蛋白尿的出現(xiàn)；并且腎組織中CAT、GSH-Px、SOD活性逐漸降低，MDA含量逐漸升高。說明甲狀腺激素水平的增高可以影響腎臟正常的生理功能；甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠