犬氧化損傷性白內(nèi)障晶體狀結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)化生長因子β1mRNA表達的變化.pdf

1、目的:本試驗旨在探索犬氧化損傷性白內(nèi)障發(fā)病進程中晶狀體結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)化生子因子β1(TGF-β1) mRNA表達的關(guān)系。
　　方法:(1)選擇36只健康的重慶本地雜交犬（5～6kg），隨機分成試驗組和空白對照組兩組，其中30只犬作為試驗組，6只為空白對照組。其中試驗組犬采用Fenton溶液進行晶狀體囊袋內(nèi)注射法建立犬白內(nèi)障模型。每日使用裂隙燈觀察犬白內(nèi)障的成模情況，根據(jù)裂隙燈的檢查結(jié)果并參照國際分級標準LOCSⅢ和Kador等將晶狀體混

2、濁度分級并略作修改，將犬白內(nèi)障的發(fā)展程度分成Ⅰ～Ⅳ期。(2)分別選取3只正常對照組和15只試驗組犬眼的晶狀體制作HE染色切片，借助光鏡觀察晶狀體病理組織變化。(3)取3只空白對照組犬晶狀體并對目的基因TGF-β1和內(nèi)參基因GAPDH進行RT-QPCR(real-timequantitative PCR)后，獲得符合熒光定量PCR條件所需的標準曲線、熔解曲線和擴增曲線，用于犬TGF-β1和GAPDH基因在晶狀體表達研究。選擇15只試驗犬為

3、研究對象，分別選取犬白內(nèi)障Ⅰ～Ⅴ期的晶狀體進行RT-QPCR檢測，最后采用△△Ct法分析晶狀體組織中TGF-β1基因的相對表達量。
　　試驗結(jié)果:(1)試驗組的60只犬眼經(jīng)過4～6天后，散瞳可見晶狀體周邊部皮質(zhì)出現(xiàn)細小囊泡或細小囊泡群形成，即為白內(nèi)障Ⅰ期;9～11天散瞳后晶體周邊空泡自赤道部向前皮質(zhì)擴展，在周邊前或后皮質(zhì)逐漸形成環(huán)狀或戒指狀混濁,不影響觀察眼底，形成白內(nèi)障Ⅱ期;14～18天不散瞳即可見到晶狀體皮質(zhì)區(qū)有放射狀的混濁，

4、慢慢形成灰白色混濁，通過混濁區(qū)眼底細節(jié)不清楚，形成白內(nèi)障Ⅲ期;22～23天晶體皮質(zhì)混濁區(qū)融合，可見到新月形投影或水裂，混濁區(qū)眼底細節(jié)不可見，形成白內(nèi)障Ⅳ期;25～30天晶狀體皮質(zhì)及核完全呈灰白色混濁，遮蔽眼底形成白內(nèi)障Ⅴ期，即成熟白內(nèi)障期。整個白內(nèi)障模型的形成過程中空白對照組的犬晶狀體始終透明澄澈。(2)組織病理學結(jié)果顯示:觀察正常晶狀體切面，可見前囊膜下有一單層立方形晶狀體上皮細胞(LECs)大小較均勻，形態(tài)一致，細胞染色均勻，細胞圓

5、且居中，細胞之間連接緊密。在犬白內(nèi)障的形成過程中觀察到從Ⅰ期起晶狀體前囊膜下LECs排列紊亂，大小不一，細胞核染色不均勻且數(shù)量減少，當發(fā)展到Ⅲ、Ⅴ期時LECs與前囊膜連接明顯疏松，Ⅴ期時前囊膜最終破裂;正常晶狀體的后囊膜下無LECs分布且囊膜形態(tài)規(guī)則完整。當犬白內(nèi)障由Ⅲ期向Ⅴ期發(fā)展時后囊膜形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)改變，囊膜與皮質(zhì)區(qū)連接疏松，最終在白內(nèi)障Ⅴ期時后囊膜變得不完整，說明后囊膜破裂;正常晶狀體赤道部的上皮細胞分化活躍，可以見到較多未成熟晶狀

6、體細胞的細胞核且晶狀體纖維無論是在深皮質(zhì)區(qū)或是淺皮質(zhì)區(qū)的排列都是緊密有序，通過觀察可見犬白內(nèi)障發(fā)展從Ⅰ期時赤道部的LECs數(shù)量開始逐漸減少，到Ⅴ期時LECs已經(jīng)很少了，細胞核染色不均且深，在Ⅴ期時可見赤道部皮質(zhì)區(qū)周圍的晶狀體纖維之間有縫隙，呈現(xiàn)出連接疏松，甚至出現(xiàn)斷裂崩解，走向改變的現(xiàn)象。(3)犬白內(nèi)障發(fā)展的五個時期中TGF-β1mRNA的表達量均有增加。犬白內(nèi)障Ⅰ期時TGF～β1mRNA表達量是空白對照組的1.29倍，Ⅱ期時TGF-β

7、1mRNA表達量是空白對照組的2.72倍，Ⅲ期時TGF-β1mRNA的表達量是空白對照組的2.82倍，達到最高，Ⅳ期時TGF-β1 mRNA的表達量是空白對照組的1.75倍，Ⅴ期時TGF-β1mRNA的表達量是空白對照組的1.25倍。與空白對照組相比犬白內(nèi)障發(fā)展中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的TGF-β1mRNA的表達水平都上調(diào)，差異極其顯著(p＜0.01)，其中以Ⅲ期最高，Ⅱ期其次。且Ⅲ期和Ⅱ期表達水平顯著高于其它白內(nèi)障發(fā)展的三個時期(p＜0.05)