安宮清開靈抑制大鼠腦出血后腦水腫的機制研究.pdf

1、本論文由文獻(xiàn)綜述和實驗研究兩部分組成。 文獻(xiàn)綜述概述了腦出血后腦水腫形成的原因和中醫(yī)藥對腦出血的研究狀況。 實驗研究部分包括三方面的內(nèi)容，第一部分主要為與腦水腫形成相關(guān)的損害因素表達(dá)時間過程的研究，利用膠原酶誘導(dǎo)大鼠腦出血模型觀察腦出血后24小時、48小時、72小時與7天時iNOS與MMP-2的表達(dá)情況，并以此討論腦出血后iNOS誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞毒性腦水腫、MMP-2破壞血腦屏障誘導(dǎo)的血管源性腦水腫，由此來研究腦出血后腦水腫

2、的形成原因。第二部分主要為藥效原理研究，通過給予腦出血大鼠中藥治療，研究藥物對各種腦水腫引發(fā)因素的作用，分析安宮清開靈注射液抗腦出血腦水腫的作用途徑。第三部分主要為以組織病理為核心的腦水腫藥效學(xué)研究，通過HE染色比較正常組、模型組、對照藥組及不同劑量的安宮清開靈組之間的腦組織病理學(xué)改變，直觀地觀察腦出血后腦組織的損傷及安宮清開靈的治療作用，并通過選用不同劑量的安宮清開靈來確定藥物治療的最佳劑量。此外，還通過免疫組化定位分析了腦水腫致發(fā)因

3、素在腦組織中的表達(dá)部位。 研究結(jié)果如下： 1.iMP-2、MMP-9參與了腦出血后腦水腫的形成 MMP-2、MMP-9的過度表達(dá)，進(jìn)而破壞血腦屏障的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，誘發(fā)腦出血后局部血腫灶的腦水腫被認(rèn)為是腦出血后產(chǎn)生血管源性腦水腫的重要原因。Abilleira等研究發(fā)現(xiàn)，腦出血患者出現(xiàn)神經(jīng)癥狀24小時內(nèi)MMP-9濃度顯著升高，并與血腫周圍水腫呈正相關(guān)。 本實驗研究發(fā)現(xiàn)大鼠腦出血后48小時MMP-9表達(dá)

4、達(dá)到峰值，與國內(nèi)大多實驗研究的觀點相符，提示在腦出血中期(48小時)形成的血管源性腦水腫主要是MMP-9的過度表達(dá)所致。 國外早期有實驗研究認(rèn)為MMP-2的表達(dá)與MMP-9不同，從24小時開始表達(dá)，5天時達(dá)到峰值，并且維持的時間較長，可達(dá)兩周之久，提示可能與巨噬細(xì)胞參與的修復(fù)作用有關(guān)。 本實驗通過ELISA檢測大鼠血清中MMP-2含量并未發(fā)現(xiàn)24小時含量的提高，但是在48小時與72小時出現(xiàn)了明顯的上升，并于72小時達(dá)到峰

5、值，7天時雖有下降，但仍處于高水平，與國外研究結(jié)果相符。 本實驗研究顯示了安宮清開靈注射液低劑量能夠較顯著的抑制48小時MMP-9的表達(dá)，中劑量能夠顯著的抑制48小時MMP-9的表達(dá)，而高劑量的安宮清開靈注射液與作為陽性藥的清開靈注射液卻不能夠抑制48小時MMP-9的表達(dá)，此外在本實驗中亦沒有觀察到安宮清開靈注射液與清開靈注射液抑制7天時MMP-9的表達(dá)，清開靈注射液能夠較顯著的抑制48小時MMP-2的表達(dá)，安宮清開靈注射液各個

6、劑量都能夠顯著的抑制48小時MMP-2的表達(dá)，而清開靈注射液與安宮清開靈注射液都不能夠抑制7天時MMP-2的表達(dá)，通過與陽性藥組及模型組的比較，以及組織病理學(xué)結(jié)果的佐證，發(fā)現(xiàn)安宮清開靈注射液能夠顯著地抑制腦出血急性期的腦水腫。 2.iNOS參與了腦出血后腦水腫的形成 NOS作為N0合成的限速酶，在腦出血后大量表達(dá)(尤其是iNOS)，可能就是腦出血誘導(dǎo)iNOS過量表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生具有毒性作用的NO，導(dǎo)致神經(jīng)元死亡，加重腦水

7、腫的主要原因。Skula A等的實驗研究發(fā)現(xiàn)，地塞米松減輕腦出血后腦水腫的藥理學(xué)作用正是其抑制了iNOS的表達(dá)。 本實驗研究發(fā)現(xiàn)在大鼠腦出血后48小時與7天時iNOS表達(dá)顯著增高，與MMP-2、MMP-9表達(dá)的峰值一致，因此可認(rèn)為腦出血后的腦水腫形成并非由單一因素所引起，而可能是由多種因素共同作用，進(jìn)而加重了腦出血后的損傷，為臨床治療和緩解腦出血后腦水腫的產(chǎn)生提供了基礎(chǔ)研究的理論與實驗依據(jù)。 本實驗發(fā)現(xiàn)安宮清開靈注射液各

8、個劑量組能夠極顯著的抑制腦出血后48小時和7天時iNOS的表達(dá)，而清開靈注射液不能夠抑制48小時iNOS的表達(dá)?？梢姲矊m清開靈注射液對于腦出血由iNOS誘導(dǎo)的腦水腫有明顯的治療效果。 3.血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)參與了腦出血后腦水腫的形成 一般研究認(rèn)為VEGF可通過信號傳導(dǎo)通路對多種類型的神經(jīng)細(xì)胞具有直接的營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用，增強細(xì)胞活性和存活能力，并能促進(jìn)軸突再生。但是對于其在腦出血后的作用機制仍然存在爭議，一

9、些研究認(rèn)為VEGF在腦出血后的局部血腫區(qū)表達(dá)，能夠作用于腦血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR-1和VEGFR-2，從而激活了一系列的損傷信號通路，誘導(dǎo)新生血管的生成，以此產(chǎn)生腦保護(hù)作用，而另一些研究結(jié)果認(rèn)為VEGF在腦出血后早期即能夠單獨作用，破壞血腦屏障，加重腦水腫，在腦出血中期又能與其他因素如MMP-9、Ang-2等共同作用增加血腦屏障通透性，導(dǎo)致腦水腫。 在本實驗研究中顯示VEGF在腦出血損傷后的48小時出現(xiàn)了顯著的提高，在7天