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
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文檔簡介
1、近幾年來,我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展甚為迅速,這對我國畜牧業(yè)的發(fā)展與繁榮有很大的促進作用。但是,目前所暴露的不利于畜牧業(yè)發(fā)展的各種因素已越來越明顯,尤其是奶牛疾病方面的因素。眾所周知,奶牛的經濟性能決定了繁殖是奶牛的頭等大事,奶牛不產犢就不能保證奶的產量,從而不可能保證良好的經濟效益,更不能促進乳制品工業(yè)的發(fā)展。 奶牛子宮內膜炎是奶牛不孕癥的重要原因之一,而奶牛不孕癥是一種主要的世界性經濟問題(SaedOMetal,1983)。美國因
2、不孕癥造成的損失每年可達4~5億美元,英國報導不孕牛中約95%由子宮內膜炎引起(瞿自明等,1986)。前蘇聯報導奶牛子宮炎的發(fā)病率占34.9~39.8%(張彥明,1998),Andriamanga等對幾個牛群進行了四年的研究,表明子宮炎的發(fā)病率占20~40%(Andriamanga,1984)。在國內,奶牛子宮內膜炎的發(fā)病率也很高,瞿自明等1983~1985年對北京、上海、南寧、蘭州等16個城市41個奶牛場調查的結果為,子宮內膜炎的發(fā)病
3、率為17.26%(張彥明,1998),東北地區(qū)奶牛場的奶牛子宮內膜炎占奶牛病的20~40%(瞿自明等,1986)。由此可見,奶牛子宮內膜炎所造成的損失的繁殖和經濟損失相當嚴重,已在很大程度上制約了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。 奶牛子宮內膜炎的相關研究內容,目前主要集中在病原菌的分離、鑒定及抗生素的治療效果上。資料表明,引起奶牛子宮內膜炎的病原菌絕大多數為條件性致病菌,專一性的致病菌只占很少一部分,這使開發(fā)“微生態(tài)制劑”治療奶牛子宮內膜炎成
4、為可能。為此,本試驗首先對健康奶牛產道內正常菌群作了初步調查;為搞清產后健康奶牛子宮內細菌動態(tài)變化規(guī)律,我們從不同奶牛場選出了20頭健康奶牛進行了跟蹤采樣、調查;為臨床用藥提供依據,本試驗對子宮內膜炎患牛進行了病原菌的分離、鑒定并進行了耐藥性分析;為準確的檢測子宮內膜炎的病原菌,本試驗針對主要病原菌建立了多重PCR快速檢測的方法;最后,針對沙門氏菌性子宮內膜炎建立了多種血清型的多重PCR快速檢測的方法。具體內容介紹如下: 首先,
5、我們對健康奶牛產道內正常菌群作了初步的調查。結果表明,乳酸桿菌為正常奶牛產道內的主要寄生菌,其次是表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌。但是未配青年牛的陰道內,乳酸桿菌的分離率并不高。試驗還發(fā)現,奶牛陰道內的寄生菌一般為2~3種。其次,我們對產后健康奶牛子宮內細菌動態(tài)變化規(guī)律進行了研究。結果表明,20頭產后奶牛的子宮均發(fā)生了細菌污染,子宮內細菌的種類及其數量隨產后時間的不同,而呈現規(guī)律性的變化:在產后第2d,子宮內呈污染狀態(tài),細菌數量迅速
6、增加,四組(以奶牛場為單位分組,5頭/組)試驗的計數結果分別達到了(8.34±0.66)×105、(2.15±0.55)×105、(1.90±0.51)×105、(2.97±0.29)×105,此后細菌數量呈緩慢增長趨勢,在產后第8d時子宮內細菌計數達到最高,四組試驗技術結果的平均數分別為:(4.25±1.72)×107、(4.01±1.61)×107、(3.95±1.42)×107、(3.05±1.12)×107。此外,還對對產后不同
7、階段所分離到的細菌的種類和數量進行了詳細的比較與分析。 再次,為調查奶牛子宮內膜炎的主要病原菌,我們對奶牛子宮內膜炎的病原菌進行了分離、鑒定,并對病原菌進行了耐藥分析。對山東省四個大型奶牛場的60頭子宮內膜炎患牛進行采樣,病原菌分離率如下:埃希氏大腸桿菌10株(16.95%)、葡萄球菌屬8株(13.6%)、芽孢桿菌屬6株(10.2%)、鏈球菌屬5株(8.5%)(其中溶血性鏈球菌2株)、棒狀桿菌屬5株(8.5%)、不動桿菌屬5株(
8、8.5%)、雙球菌5株(8.5%)、腸桿菌屬4株(6.8%)、沙門氏菌3株(5.1%)、克雷伯氏桿菌屬2株(3.4%)、耶爾森菌屬2株(3.4%)、摩拉桿菌屬1株(1.7%)、而且分離到了梭菌屬3株(嚴格厭氧菌)。藥敏試驗結果表明,大多數病原菌對喹諾酮類藥物、阿莫西林、土霉素、及氨芐青霉素等藥物耐藥率較高,而對頭孢菌素類藥物和氨基糖苷類藥物耐藥率則相對較低。 由于傳統(tǒng)的鑒定細菌的方法十分繁瑣,并且耗時費力。因此,我們對分離率較高
9、的金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌分別設計引物,然后用標準菌株建立了三重PCR的方法,并用該方法進行了臨床檢測試驗。結果表明,該方法的敏感性是99%,特異性是100%,有效性是98%。其檢測的結果與常規(guī)生化鑒定結果相一致,未發(fā)現假陽性結果,并且大大縮短了時間,有利于進一步推廣使用。 在試驗過程中,借助傳統(tǒng)的方法,我們從流產奶牛的病料中分離到了沙門氏菌。本試驗針對常見的腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、牛病沙2門氏菌(C2血清型)、4
10、,5,12:Ⅰ血清型沙門氏菌的特異序列分別設計了引物。此外,還根據沙門氏菌屬外膜蛋白設計了一對通用引物。并用標準菌株建立多重PCR的快速檢測方法。結果表明,四株標準菌株均獲得了特異性的擴增,這說明該方法完全可行。用該方法檢測樣品時,共檢測出了四份鼠傷寒沙門氏菌陽性樣品,檢測的結果與常規(guī)生化鑒定的結果相一致,未見假陽性現象。本試驗的結果證實,沙門氏菌的確能夠引起奶牛的子宮內膜炎并有可能導致懷孕奶牛的流產。并且首次建立了奶牛沙門氏菌性子宮內
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