奶牛子宮內(nèi)膜抗菌多肽的分離與純化.pdf

1、從奶牛子宮粘液和奶牛子宮組織分離抗菌活性肽的工作在國內(nèi)外尚未見報道。本研究以奶牛子宮內(nèi)膜粘液和奶牛子宮內(nèi)膜組織為研究對象，對其子宮粘液和子宮組織抗菌肽成分進行了提取、分離和純化，并對水平電泳洗脫樣品和反相高效液相色譜（RP-HPLC）分離的樣品分別進行了瓊脂糖彌散法抗菌活性檢測。本試驗共分兩個部分： 第一部分、奶牛子宮粘液抗菌多肽的分離、純化及抗菌活性分析 新鮮奶牛子宮粘液經(jīng)5%乙酸浸提，將酸溶性提取物進行制備性酸性尿素

2、聚丙烯酞胺凝膠電泳（AU-PAGE），并用電泳瓊脂糖彌散法檢測其有一條抗菌條帶，切下相應的抗菌條帶進行洗脫電泳。洗脫物透析凍干后，經(jīng)電泳瓊脂糖彌散法檢測對大腸桿菌BL-21、金黃色葡萄球菌26003具有抗菌活性。洗脫樣品經(jīng)RT-HPLC分離，在第45分鐘保留時間純化出單一分子，瓊脂糖彌散法檢測顯示其對大腸桿菌BL21、金黃色葡萄球菌26003具有抗菌活性；Tricine-SDS-PAG電泳檢測其分子量約為14kD左右的抗菌多肽。

3、 第二部分、奶牛子宮組織抗菌多肽的分離、純化及抗菌活性分析 新鮮的奶牛子宮組織，經(jīng)5%乙酸浸提，將酸溶性提取物進行制備性酸性尿素聚丙烯酞胺凝膠電泳（AU-PAGE），并用電泳瓊脂糖彌散法檢測其有兩條抗菌條帶，切下相應的抗菌條帶進行洗脫電泳。洗脫物透析凍干后，經(jīng)電泳瓊脂糖彌散法檢測對大腸桿菌BL-21、金黃色葡萄球菌26003、牛致病性大腸桿4605、綠膿桿菌10104具有抗菌活性。洗脫樣品通過RT-HPLC分離，其中上條條帶在第

4、45分鐘保留時間純化出單一分子，該分子對大腸桿菌BL-21有較強的抑菌活性；而下條條帶在第35、43、45分鐘出峰時間分別純化出單一成分，這三種分子對大腸桿菌BL-21也有較強的抑菌活性。Tricine-SDS-PAG電泳檢測其分子量，結(jié)果表明，其中上條條帶45min樣品分子量約為14kD的抗菌多肽其分子量與奶牛子宮粘液分離純化的分子量相似，說明其可能為同一物質(zhì)；而下條條帶在35min的樣品分子量約為14-16kD的抗菌多肽，43min