奶牛子宮內(nèi)膜炎致病大腸桿菌的分離、鑒定及耐藥性研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜炎是導(dǎo)致奶牛不孕癥的生殖系統(tǒng)疾病之一。該病主要由分娩或產(chǎn)后子宮感染病原微生物引起。臨床上多使用抗微生物藥物對(duì)其進(jìn)行治療.在藥物選擇壓力作用下，病原菌中的耐藥菌株不斷增多，不僅影響了畜牧業(yè)的良性發(fā)展，而且動(dòng)物源性病原菌對(duì)抗微生物藥物耐藥性的形成也給人類(lèi)健康帶來(lái)了嚴(yán)重的潛在威脅。因此，為了對(duì)引起奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌進(jìn)行危害性分析和評(píng)估，并指導(dǎo)臨床合理用藥,本研究對(duì)內(nèi)蒙古呼和浩特市周邊地區(qū)分離的奶牛子宮內(nèi)膜炎大腸桿菌進(jìn)行了血清型鑒定

2、和MICs值測(cè)定。 研究發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎大腸桿菌的分離率為54.3％(57/105)，且分離菌株的優(yōu)勢(shì)血清型為O111:K58(B4)。57株大腸桿菌對(duì)磺胺類(lèi)、芐胺嘧啶類(lèi)、四環(huán)素、頭孢唑啉、廣譜青霉素類(lèi)的氨芐西林、阿莫西林和氨基糖苷類(lèi)的卡那霉素、鏈霉素以及氯霉素、多粘菌素E的耐藥率較高，在50～98％之間:而對(duì)頭孢噻呋、呋喃唑酮和氟喹諾酮類(lèi)藥物較為敏感，耐藥率在13.7～35％之間。 采用PCR技術(shù)和直接測(cè)序?qū)?/p>

3、臨床分離菌株中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ整合子/基因盒及超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)不同型別基因的分子流行病學(xué)進(jìn)行了調(diào)查和分析。結(jié)果表明，其中Ⅰ型整合子的檢出率為36.8％，未檢出Ⅱ、Ⅲ型整合子。對(duì)Ⅰ型整合酶基因陽(yáng)性菌株進(jìn)行基因盒插入?yún)^(qū)擴(kuò)增，并克隆測(cè)序，結(jié)果顯示,呼和浩特市周邊地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病性大腸桿菌中有7種基因盒流行，分別編碼了對(duì)甲氧芐啶(dhfr,dfrA1，dfrA17,dfr2d)和氨基糖苷類(lèi)藥物(aadA1、aadA2、aadA5

4、)的耐藥性。其中，基因盒排列dffA17-aadA5（69.1％)和dfrA1 aadA1(42.9％)流行最為廣泛。 通過(guò)分析57株大腸桿菌的耐藥表型和Ⅰ型整合子/基因盒分子流行病學(xué)特征發(fā)現(xiàn)，菌株是否攜帶Ⅰ型整合子與其多重耐藥水平有密切關(guān)系。整合子陽(yáng)性菌株更趨于多重耐藥，且所攜帶的耐藥基因盒可解釋菌株對(duì)磺胺、甲氧芐啶、氨基糖苷類(lèi)的耐受性，而菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥表型與其是否攜帶Ⅰ型整合子及耐藥基因盒

5、相關(guān)性不強(qiáng)。 本研究考察了不同型別ESBLs基因CTX、SHV和TEM在以上分離菌中的流行情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TEM型基因最為流行，檢出率為77.2％，而未檢出其他兩種基因型別。通過(guò)分析blaTEM基因陽(yáng)性菌株與陰性菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的耐藥情況，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs的產(chǎn)生和傳播是導(dǎo)致分離菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥的重要機(jī)制。從95.2％的Ⅰ型整合子陽(yáng)性菌株質(zhì)粒DNA上擴(kuò)增出了TEM型ESBLs基因，此結(jié)果表明Ⅰ型整合子在產(chǎn)

6、ESBLs菌株中的廣泛分布，使耐藥基因更易于在細(xì)菌間快速散播。 隨后，采用PCR技術(shù)從11株耐氟喹諾酮類(lèi)藥物的奶牛子宮內(nèi)膜炎大腸桿菌中擴(kuò)增了gyrA、parC、gyrB和parE基因的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)，通過(guò)對(duì)PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，發(fā)現(xiàn)有4株菌GyrA亞基發(fā)生了Ser83→Leu、Asp87→Asn的氨基酸替代:11株菌GyrB亞基上均發(fā)生了Pro385→Ala；有2株耐藥菌的ParE亞基發(fā)生了Ser458→Ala氨基酸