兔波氏桿菌的分離鑒定及耐藥性研究.pdf

1、兔波氏桿菌病是由支氣管敗血波氏桿菌引發(fā)的一種常見兔呼吸道疾病，主要引起成年兔的支氣管炎、鼻炎和膿皰性肺炎，斷乳仔兔和哺乳仔兔的急性死亡等。近年來(lái)，伴隨著我國(guó)規(guī)模化兔業(yè)養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，支氣管敗血波氏桿菌的感染率明顯升高，并常與葡萄球菌、多殺性巴氏桿菌等混合感染，已成為導(dǎo)致家兔發(fā)病率和死亡率增加的重要原因之一，給養(yǎng)兔業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失?？股刂委熢谛笄蒺B(yǎng)殖中是一種重要的防制手段，但由于藥物濫用，細(xì)菌耐藥性日趨嚴(yán)重，常造成藥物治療失敗。所以增

2、加對(duì)當(dāng)?shù)丶?xì)菌耐藥性及藥物敏感性狀況的認(rèn)知，對(duì)于正確分析耐藥性的發(fā)展趨勢(shì)及對(duì)臨床上指導(dǎo)合理用藥意義重大。針對(duì)當(dāng)前嚴(yán)重的多重耐藥現(xiàn)象，探究耐藥機(jī)制，針對(duì)耐藥原因找出對(duì)應(yīng)方法來(lái)延長(zhǎng)已有抗生素的敏感期和研究新藥同為重要。本實(shí)驗(yàn)在分離鑒定細(xì)菌基礎(chǔ)上，對(duì)藥物敏感性進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)耐藥基因進(jìn)行了鑒定，對(duì)耐藥傳播機(jī)制進(jìn)行了初步研究。研究主要包括以下內(nèi)容：
　　1.本實(shí)驗(yàn)2012～2014年自浙江省部分兔場(chǎng)采集病兔的鼻腔分泌物，根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、培養(yǎng)特

3、性、生化試驗(yàn)，并結(jié)合PCR方法對(duì)分離菌株進(jìn)行鑒定，分離鑒定出22株兔波氏桿菌；K-B氏紙片法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)18種常用抗生素的藥物敏感性，藥敏結(jié)果顯示，分離菌多重耐藥嚴(yán)重，對(duì)青霉素G、頭孢拉定、鏈霉素、林可霉素、克林霉素、甲氧嘧啶耐藥嚴(yán)重，而對(duì)多黏菌素B、左氟沙星、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素等藥物敏感。
　　2.針對(duì)耐藥表型對(duì)應(yīng)的耐藥基因，設(shè)計(jì)特異性引物，使用PCR法對(duì)22株兔波氏桿菌分離株進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)，并進(jìn)行測(cè)序分析。其中所有分離株均檢測(cè)到

4、β-內(nèi)酰胺類耐藥基因blaTEM，檢測(cè)率為100％；17株檢測(cè)到磺胺類藥物耐藥基因sul1，檢測(cè)率為77%；分離菌株檢測(cè)到的這兩種耐藥基因與耐藥表型相符。17株檢測(cè)到Ⅰ類整合子的整合酶基因int1，檢測(cè)率為77%，說(shuō)明整合子在兔波氏桿菌耐藥傳播機(jī)制中發(fā)揮作用。20株檢測(cè)到多重耐藥基因marC，檢測(cè)率為91%，因marC基因檢出率較高，推測(cè)波氏桿菌耐藥性與染色體基因突變介導(dǎo)的主動(dòng)外排系統(tǒng)有關(guān)。9株檢測(cè)到轉(zhuǎn)座子遺傳標(biāo)志基因merA，檢測(cè)率為

5、41%，merA基因的存在及反向PCR結(jié)果顯示TEM耐藥基因的傳播轉(zhuǎn)座子存在相關(guān)聯(lián)系。
　　3.對(duì)本研究所分離的22株兔波氏桿菌進(jìn)行了質(zhì)粒提取及消除實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，所有22株分離菌均攜帶質(zhì)粒，質(zhì)粒消除后細(xì)菌部分耐藥性狀發(fā)生變化，對(duì)氨芐青霉素、頭孢唑林、四環(huán)素、多粘菌素B等藥物的敏感性增強(qiáng)。證明了質(zhì)粒介導(dǎo)了兔波氏桿菌分離菌株的部分耐藥性。
　　本研究結(jié)果表明，兔波氏桿菌是引起兔呼吸道疾病的主要病原菌；分離菌耐藥率較高，并呈現(xiàn)多