GN52株鴨疫里默氏桿菌的傳代培養(yǎng)和鴨疫里默氏桿菌分離株耐藥性的研究.pdf

1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerellaanatipestifer，簡稱RA)感染是危害全世界野生水禽和火雞、家鴨、鵝的一種主要傳染病，當該菌與其他微生物混合感染時能造成嚴重的經濟損失。該病發(fā)病率和死亡率通常在10～30％，但有的鴨場感染鴨疫里默氏桿菌的病鴨死亡率高達75％，一旦某地區(qū)的鴨群、鵝群發(fā)生鴨疫里默氏桿菌感染，該病就會成為地方性疾病，很難徹底根除，并且經常反復爆發(fā)。到目前為止，國際上報道鴨疫里默氏桿菌共有21個血清型，且各型之間缺

2、乏交叉保護。 藥物治療作為最主要的防治手段，卻常常因為該菌極易產生耐藥性而導致治療失敗，帶來不必要的經濟損失，所以免疫接種成為防治該病的首選，但是由于鴨疫里默氏桿菌各血清型之間缺乏交叉保護，所以選用免疫地區(qū)甚至是免疫鴨場的優(yōu)勢血清型菌株制備疫苗是非常必要的。 本研究選取廣東地區(qū)優(yōu)勢血清型10型的一株致病性典型的分離株GN52為實驗株，通過連續(xù)的傳代培養(yǎng)，對其不同代次的細菌的各項生物學特性進行系統(tǒng)的研究，結果表明該實驗株G

3、N52在細菌形態(tài)、生化特性、藥物敏感性和毒力變化四個方面特性都比較穩(wěn)定。進而以GN52為實驗株按照常規(guī)方法制備白油佐劑和蜂膠佐劑滅活疫苗，抗原量是50億/ml，經無菌和安全檢驗合格后，均按0.5ml/只劑量對7日齡櫻桃谷鴨進行免疫，并在免疫后第1、2、3、4、5、6、7周分別攻毒，測定免疫保護率，結果表明油乳苗的免疫效果更佳，免疫后第14天達到最大保護率。對油乳苗分別選定0.05ml/只，0.1ml/只和0.3ml/只三種劑量免疫7日齡

4、櫻桃谷鴨，免疫后第14天攻毒，結果0.05ml/只劑量組保護率為40％(2/5)，0.1ml/只和0.3ml/只兩個劑量組保護率均為100％(5/5)，表明該疫苗的最小免疫劑量≤0.1ml/只。 由于喹諾酮類藥物在臨床治療中廣泛應用，近年來耐藥現象日益嚴重，本實驗為了探討耐喹諾酮類藥物的鴨疫里默氏桿菌耐藥機制，對臨床分離的31株鴨疫里默氏桿菌作為研究對象，采用微量肉湯稀釋法對其對喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星和諾氟沙星的最低抑菌濃度(MI

5、C)進行了測定，并對其螺旋酶區(qū)進行測序，尋找鴨疫里默氏桿菌對喹諾酮類抗生素耐藥菌株的gyrAQDRD突變熱點和突變規(guī)律。結果發(fā)現，本實驗室分離的31株：RA，26株已經對環(huán)丙沙星產生了中度以上的耐藥，其中19株已經產生了高度耐藥；有30株對諾氟沙星產生了中度以上的耐藥，27株產生了高度耐藥，只有1株低度耐藥。31株RA中有25株菌對兩種藥物都產生了中度以上的耐藥，占菌株總數的80.6％。螺旋酶區(qū)測序結果表明31株諾氟沙星耐藥菌株均出現了