鴨疫里默氏桿菌耐藥性與耐藥基因研究.pdf

1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer，RA)病是一種主要侵害鴨、火雞和其他鳥類的接觸性傳染病，該病又稱為新鴨病、鴨疫綜合征、傳染性漿膜炎和鴨疫巴氏桿菌病等。該病主要病理變化是纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、腦膜炎、干酪樣輸卵管炎等，發(fā)病率高，病死率也高。耐過鴨多成僵鴨，生長遲緩，造成極大的經(jīng)濟損失，是目前危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要傳染病之一。藥物治療作為最主要的防治手段，卻常常因為該菌極易產(chǎn)生耐藥性而導致治療失敗，帶來

2、不必要的經(jīng)濟損失，因此開展對該菌的耐藥性及耐藥基因方面的研究尤為重要。 本實驗自臨床分離到22株鴨疫里默氏桿菌，在藥敏試驗的基礎上，利用PCR技術，對該菌的基因盒一整合子系統(tǒng)進行了檢測，從分子水平上研究該菌的耐藥性產(chǎn)生與傳播機制。 本研究自浙江省部分鴨場收集出現(xiàn)典型漿膜炎病變的病死鴨肝臟、心臟，進行細菌的分離、純化培養(yǎng)、生化鑒定、血清型分型。共分離得到22株RA，其中4株為RA1型，14株為2型，1株為10型，3株為11

3、型，表明在浙江地區(qū)流行的RA還是以2型為主。 本研究采用紙片法對分離菌株進行藥敏試驗，調(diào)查、分析浙江省鴨疫里默氏桿菌的耐藥特性。本研究所涉及菌株的藥敏試驗結果顯示，浙江省鴨疫里默氏桿菌臨床分離株多重耐藥現(xiàn)象十分嚴重，對卡那霉素、丁胺卡那、青霉素、新霉素的耐藥性很高，對紅霉素和氯霉素最為敏感，極敏感菌株分別達到了63.6％(14/22)和40.9％，所有菌株對氯霉素都敏感，沒有耐藥現(xiàn)象。 本研究成功的利用PCR技術，首次對

4、鴨疫里默氏桿菌浙江分離株進行了基因盒．整合子系統(tǒng)的檢測。根據(jù)Genbank中已發(fā)表的I型整合子的I型整合酶基因序列、5’和3’端保守區(qū)的序列，利用軟件Primerprimer 5.0設計特異性引物并合成，進行PCR擴增。在對擴增產(chǎn)物進行初步酶切鑒定的基礎上，克隆、測序。序列分析結果表明，所有供試菌株中都含有I型整合子結構，且I型整合酶基因、5’CS、3’CS與其他細菌中的該結構同源性極高，為同一結構。對整合子可變區(qū)進行擴增得到兩種大小不