幽門(mén)螺桿菌的耐藥性研究.pdf

1、慢性胃炎和消化性潰瘍的是人類(lèi)常見(jiàn)病、多發(fā)病，幽門(mén)螺桿菌(Helicobacterpylori，Hp)是其重要病因，Hp也與胃癌和黏膜相關(guān)樣淋巴組織淋巴瘤有一定的相關(guān)性。1994年，Hp被世界衛(wèi)生組織正式列為第一類(lèi)致癌原(Group Icarcinogen)，美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心也將Hp感染性疾病列為近年新出現(xiàn)的傳染病。 隨著抗生素在根除Hp治療中的廣泛應(yīng)用，Hp耐藥株的發(fā)生率不斷上升，而Hp耐藥菌株的出現(xiàn)是導(dǎo)致治療失敗的主要

2、原因。由于各地區(qū)抗生素應(yīng)用品種及習(xí)慣的差異等，耐藥率在不同國(guó)家和地區(qū)也會(huì)有所不同，因此重視對(duì)抗生素耐藥菌株的監(jiān)測(cè)和研究，不僅可以了解Hp耐藥狀況，指導(dǎo)臨床用藥，而且可以克服其耐藥性，提高根除率，避免耐藥株的產(chǎn)生。 本研究通過(guò)體外檢測(cè)胃黏膜分離培養(yǎng)的Hp，觀察本院Hp對(duì)阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素和甲硝唑的耐藥情況，為臨床根除Hp的抗生素選擇提供依據(jù)，并探討Hp菌株對(duì)克拉霉素的耐藥可能機(jī)制。 材料與方法 (1)菌株

3、的來(lái)源和培養(yǎng)：內(nèi)鏡常規(guī)方法取胃腸疾病患者的胃黏膜組織塊，涂抹法接種于改良布氏培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)箱微需氧環(huán)境培養(yǎng)3～6d。對(duì)菌落進(jìn)行菌落形態(tài)觀察和生化反應(yīng)(觸酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)和尿素酶試驗(yàn))，取陽(yáng)性者傳代。菌種保存于-80℃。 (2) 藥敏實(shí)驗(yàn)：將純培養(yǎng)的Hp調(diào)至6×10<'7>CFU/mL菌懸液，涂稚在改良布氏羊血平板上，貼上藥敏紙片，放入培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)4d后，測(cè)量抑菌環(huán)大小。 (3) DNA提取：收集純培養(yǎng)4

4、d的Hp菌株，采用酚-氯仿法提取其DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?(4) Hp 23SrRNA基因的PCR-RFLP分析：PCR擴(kuò)增Hp 23SrRNA基因中含有A2142G和A2143G的基因片段，1.5﹪的瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，在300bp位置有一條帶者，進(jìn)一步用限制性內(nèi)切酶BbsI(A2142G)和BsaI(A2143G)酶切，1﹪的瓊脂糖凝膠電泳觀察譜型，記錄結(jié)果。 結(jié)果 (1) 菌株的耐藥率

5、：43株Hp菌株中對(duì)阿莫西林耐藥的有4株(9.3﹪)，對(duì)克拉霉素耐藥的有8株(18.6﹪)，對(duì)甲硝唑耐藥的有23株(53.5﹪)，未發(fā)現(xiàn)對(duì)呋喃唑酮耐藥菌株；對(duì)克拉霉素和甲硝唑共同耐藥的有5株，對(duì)阿莫西林和甲硝唑共同耐藥的有1株。 (2)PCR-RFLP：43株Hp 23SrRNA基因中含有A2142G和A2143G的基因片段經(jīng)PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物長(zhǎng)度300bp，進(jìn)一步將PCR產(chǎn)物用BbsI(A2142G)和BsaI(A2143G

6、)酶切后，8株對(duì)克拉霉素耐藥Hp菌株中有7株其PCR產(chǎn)物經(jīng)BsaI酶切后分別得到200bp、100bp的兩個(gè)片段，1株對(duì)克拉霉素耐藥Hp菌株經(jīng)BsaI酶切后得到一個(gè)300bp片段，8株對(duì)克拉霉素耐藥Hp菌株其PCR產(chǎn)物經(jīng)BbsI酶切后均分別得到一個(gè)300bp片段；對(duì)29株對(duì)克拉霉素敏感的Hp菌株分別進(jìn)行BbsI和BsaI酶切，均分別得到一個(gè)300bp片段。 結(jié)論 (1)本研究中HP菌株對(duì)甲硝唑耐藥比較普遍，對(duì)克拉霉素有