海南地區(qū)幽門螺桿菌對(duì)多種抗生素耐藥性的探討.pdf

1、目的:
　　 1.評(píng)估E—test法檢測(cè)利福平和四環(huán)素耐藥性的可靠程度,為臨床提供方便的檢測(cè)手段。
　　 2.檢測(cè)幽門螺桿菌對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、利福平、四環(huán)素的最低抑菌濃度,計(jì)算耐藥率,比較男性與女性、慢性胃炎與消化性潰瘍、城市與農(nóng)村患者幽門螺桿菌感染株的耐藥差異,了解海南地區(qū)幽門螺桿菌的耐藥情況,指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗生素。
　　 方法:2008年7月到2009年7月在海南省人民醫(yī)院行胃鏡檢查并行

2、幽門螺桿菌培養(yǎng)的患者共321例,年齡17—82歲(平均50歲)。經(jīng)胃鏡檢查取得活檢標(biāo)本,在微需氧環(huán)境(含5％的O2、10％的CO2、85％的N2)培養(yǎng)。符合菌落、形態(tài)特征,尿素酶、氧化酶試驗(yàn)均陽(yáng)性者確定為幽門螺桿菌。最終,分離出幽門螺桿菌菌株95例用于試驗(yàn),分離自95位患者.其中男性45例、女性50例,慢性胃炎52例、消化性潰瘍41例、胃癌2例,城市人員60例、農(nóng)村人員35例。試驗(yàn)所需抗菌藥物粉末均由Sigma公司生產(chǎn)。所有藥物均在使用

3、當(dāng)天按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)規(guī)定新鮮溶解和配置。用瓊脂稀釋法和E-test法同時(shí)檢測(cè)幽門螺桿菌對(duì)利福平和四環(huán)素的耐藥性。按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)的規(guī)定進(jìn)行瓊脂稀釋法檢測(cè)利福平和四環(huán)素的敏感性。取利福平和四環(huán)素的菌懸液分別點(diǎn)樣接種到各個(gè)不同藥物濃度的培養(yǎng)基上。將瓊脂平板于37℃微需氧環(huán)境(含5％的O2、10％的CO2、85％的N2)中培養(yǎng),72小時(shí)后觀察結(jié)果。以無(wú)菌生長(zhǎng)的藥物最低稀釋度作為最低抑菌濃度(MI

4、C)。按照說(shuō)明書用E-test法檢測(cè)利福平和四環(huán)素的敏感性。將E—test試劑條貼放在瓊脂表面。將瓊脂平板于37℃微需氧環(huán)境中培養(yǎng),72小時(shí)后觀察結(jié)果。于橢圓形抑菌環(huán)與E—test試劑條的交界點(diǎn)讀取MIC值。同樣的,用E-test法檢測(cè)幽門螺桿菌對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林的耐藥性。每次試驗(yàn)用ATCC43504質(zhì)控菌株作參照。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:本研究數(shù)據(jù)處理使用統(tǒng)計(jì)軟件SAS9.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料的相關(guān)分析若資料服從

5、正態(tài)分布使用pearson相關(guān)分析,若資料不服從正態(tài)分布使用spearman等級(jí)相關(guān)分析,計(jì)數(shù)資料組間率的比較采用x2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 (1)在瓊脂稀釋法檢測(cè)的95株幽門螺桿菌菌株中,利福平的耐藥率為1.1％,MIC范圍0.004～8mg/L,MIC50為0.03125mg/L,MIC90為0.25mg/L；四環(huán)素的耐藥率為0％,MIC范圍0.0156～2mg/L,MIC50為0

6、.125mg/L,MIC90為0.5mg/L。在E-test法檢測(cè)的95株Hp菌株中,利福平的耐藥率為1.1％,MIC范圍0.008～8mg/L,MIC50為0.016mg/L,MIC90為0.25mg/L；四環(huán)素的耐藥率為0％,MIC范圍0.016～1mg/L,MIC50為0.094mg/L,MIC90為0.5mg/L。兩種方法檢測(cè)得到的幽門螺桿菌對(duì)利福平和四環(huán)素的耐藥率相同。兩種方法測(cè)得兩種藥物對(duì)Hp的MIC值分別進(jìn)行相關(guān)分析,得相

7、關(guān)系數(shù)r值分別為0.90、0.91。兩種方法檢測(cè)得到的MIC值不超過(guò)±1稀釋度的百分比均為95.8％。
　　 (2)在E-test法檢測(cè)的95株幽門螺桿菌菌株中,克拉霉素的耐藥率為27.4％,MIC范圍0.016～256mg/L,MIC50為0.25mg/L,MIC90為32mg/L；左氧氟沙星的耐藥率為25.3％,MIC范圍0.008～32mg/L,MIC50為0.25mg/L,MIC90為16mg/L；阿莫西林的耐藥率為6.

8、3％,MIC范圍0.016～32mg/L,MIC50為0.032mg/L,MIC90為0.75mg/L。
　　 (3)在95位患者的幽門螺桿菌菌株中:
　　 45例為男性,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐藥的菌株數(shù)分別為:11、11、2,耐藥率分別為24.4％、24.4％和4.4％。50例為女性,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐藥的菌株數(shù)分別為:15、13、4,耐藥率分別為30.0％、26.0％和8.0％。兩兩比較,

9、P值均大于0.05(差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 52例為慢性胃炎患者,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐藥的菌株數(shù)分別為:12、13、3,耐藥率分別為23.1％、25.0％和5.8％。41例為消化性潰瘍患者,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐藥的菌株數(shù)分別為:13、11、3,耐藥率分別為31.7％、26.8％和7.3％。兩兩比較,P值均大于0.05(差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 60例來(lái)自城市,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫

10、西林耐藥的菌株數(shù)分別為:12、11、1,耐藥率分別為20.0％、18.3％和1.7％。35例來(lái)自農(nóng)村,對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星和阿莫西林耐藥的菌株數(shù)分別為:14、13、5,耐藥率分別為40.0％、37.1％和14.3％。兩兩比較,P值均小于0.05(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 結(jié)論:
　　 1、瓊脂稀釋法和E-test法體外檢測(cè)幽門螺桿菌對(duì)利福平、四環(huán)素的耐藥結(jié)果相當(dāng)。E-test法操作簡(jiǎn)單,更適合在臨床推廣運(yùn)用。

11、　　 2、海南地區(qū)幽門螺桿菌體外對(duì)克拉霉素、左氧氟沙星的耐藥率已經(jīng)達(dá)到27.4％、25.3％,對(duì)阿莫西林的耐藥率仍然比較低,對(duì)利福平敏感,未見對(duì)四環(huán)素耐藥的菌株?？死顾睾妥笱醴承遣贿m合用于一線抗幽門螺桿菌治療,建議行藥物敏感試驗(yàn)或使用阿莫西林、四環(huán)素治療。鑒于利福平為抗結(jié)核菌的重要藥物,為保持利福平對(duì)結(jié)核菌的高度敏感性,有必要限制它的使用,并且長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)導(dǎo)致利福平耐藥的危險(xiǎn)因素。建議用于補(bǔ)救方案的治療。
　　 3、幽門螺桿菌