鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定及二價(jià)滅活疫苗的研制.pdf

1、鴨傳染性漿膜炎病是由鴨疫里默氏桿菌引起的接觸性傳染病[1]。該病以2～8周齡鴨最易感，呈急性或慢性敗血癥?；疾▲喅３霈F(xiàn)眼、鼻分泌物增多、拉稀、共濟(jì)失調(diào)、頭頸震顫等癥狀。剖檢以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、腦膜炎部分病例出現(xiàn)干酪性輸卵管炎、結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎，死亡率10％～80％，耐過(guò)鴨生長(zhǎng)遲緩、飼料報(bào)酬顯著下降[2]。由于該病可通過(guò)污染的飼料、飲水、飛沫、塵土等經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚損傷等途徑傳播，在發(fā)病鴨場(chǎng)持續(xù)存在，難以撲滅，因此被認(rèn)為

2、是造成養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疫病之一。
　　 通過(guò)2008年對(duì)山東臨沂、青島等地的疑似鴨傳染性漿膜炎病死鴨進(jìn)行細(xì)菌分離，共分離細(xì)菌14株，經(jīng)形態(tài)特征、生化特性、培養(yǎng)特性、PCR鑒定和血清定型表明14株均為鴨疫里默氏桿菌，其中6株為血清1型、5株為血清2型，其余三株未定型。用分離株制備新鮮菌液，調(diào)整菌液濃度為1×109CFU/ml，對(duì)兩周齡雛鴨進(jìn)行回歸動(dòng)物試驗(yàn)，攻毒后10日內(nèi)試驗(yàn)鴨全部不同程度的發(fā)病和死亡。藥敏試驗(yàn)顯示分離菌對(duì)菌必

3、治、頭孢氨芐、氟苯尼考、慶大霉素、頭孢噻肟、先鋒霉素Ⅵ比較敏感，而大部分菌株對(duì)泰樂(lè)菌素、氟哌酸、四環(huán)素、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明存在一定程度的耐藥性。
　　 選取免疫原性良好的血清1型RA-sd3菌株和血清2型RA-sd2菌株，制備鴨疫里默氏桿菌高免血清，并建立了用于檢測(cè)鴨血清中鴨疫里默氏桿菌抗體的微量凝集試驗(yàn)(Microagglutination test，MAT)方法。在96孔(Ⅴ)型微量反應(yīng)板中，用50μL0.85％

4、的滅菌生理鹽水將50μ L待檢血清進(jìn)行倍比稀釋后，加入50μL凝集抗原（OD600值=1.452），放置濕盒中37℃反應(yīng)4h，即可觀看反應(yīng)結(jié)果。制備的凝集抗原在4℃條件下可保存5個(gè)月。此方法特異、敏感、成本較低、簡(jiǎn)單易行便于推廣使用。
　　 選用免疫原性良好的鴨疫里默氏桿菌1型RA-sd3菌株和2型RA-sd2菌株接種胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基，收獲培養(yǎng)物，調(diào)節(jié)菌量為1.2×1010CFU/ml，用終濃度為0.3％的甲醛溶液滅活后等