牛多殺性巴氏桿菌B型制苗株的篩選及A、B型二價滅活疫苗的研制.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,P.multocida）屬于牛群常見機(jī)會致病菌，現(xiàn)以A、B型兩種血清型在國內(nèi)流行，致使我國養(yǎng)牛業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。A型P.multocida在牛群經(jīng)長途運(yùn)輸、寒冷、擁擠等應(yīng)激時致病，多為并發(fā)或繼發(fā)感染；B型 P.multocida可誘發(fā)致死性敗血癥，多急性發(fā)病，病死率高。為防控牛源A、B型P.multocida在國內(nèi)流行，扼制巴氏桿菌病的傳播擴(kuò)散，減少因其遭受的經(jīng)濟(jì)損失，本研

2、究擬研制A、B型P.multocida二價滅活疫苗，并進(jìn)行疫苗效力評價，為高效防控牛巴氏桿菌病奠定理論基礎(chǔ)和實(shí)踐依據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1.牛A型及B型多殺性巴氏桿菌毒力評價
　　本實(shí)驗(yàn)室前期已篩選出A型P.multocida滅活疫苗制苗株P(guān)m-HG，現(xiàn)就實(shí)驗(yàn)室保存的三株B型P.multocida強(qiáng)毒株P(guān)m-C45、Pm-C46、Pm-C47進(jìn)行毒力以及免疫原性評價。攻毒試驗(yàn)取168只SPF小鼠，分為4個試驗(yàn)組，

3、對應(yīng)腹腔攻毒Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，每個試驗(yàn)組再分為5個劑量組（8只/組），另設(shè)一組為對照組。結(jié)果顯示，Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的LD50分別為11.1、22.3、21.3、3.1CFU；Pm-C45菌株攻毒后病理變化嚴(yán)重，組織損傷評分相對較高，可知Pm-C45毒力相對較強(qiáng)。
　　2.牛A型及B型多殺性巴氏桿菌單價苗免疫原性的評價
　　分別研制 Pm-C45、Pm

4、-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的油乳佐劑滅活疫苗。取208只SPF小鼠分為5個試驗(yàn)組，分別頸背部免疫接種上述4種滅活苗，一免后間隔兩周二免，第5試驗(yàn)組為對照組不免疫，每個試驗(yàn)組再分為4個攻毒組（8只/組），分別腹腔感染Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，另設(shè)一組為空白組。間接ELISA監(jiān)測小鼠抗體水平，記錄攻毒后兩周小鼠死亡情況并進(jìn)行病理學(xué)分析。結(jié)果顯示， Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG滅

5、活苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的最高血清抗體效價分別為1：512000、1：25600、1：3200、1：12800；Pm-C45、Pm-C46、Pm-HG滅活苗對同源菌攻毒保護(hù)率分別為56.2％、33.3%、12.5%，Pm-C47對照組攻毒未出現(xiàn)死亡無法統(tǒng)計(jì)保護(hù)率；Pm-C45、Pm-C46滅活苗對異源菌Pm-HG攻毒交叉保護(hù)率分別為25%、12.5%；免疫后小鼠同源菌攻毒病理損傷評分，Pm-C45組小鼠評分降低更多；可知Pm-C45免疫原性相

6、對較好。
　　3.牛A、B型多殺性巴氏桿菌二價滅活疫苗的評價
　　經(jīng)上述系列試驗(yàn)評價，證實(shí)了 Pm-HG的強(qiáng)毒力、高免疫原性；三株 B型P.multocida強(qiáng)毒株中Pm-C45的毒力最強(qiáng)、免疫原性最好，確定Pm-C45作為A、B型P.multocida二價滅活疫苗的B型P.multocida制苗株。更換油乳佐劑研制Pm-C45滅活苗、Pm-HG滅活苗以及二價滅活疫苗并進(jìn)行評價。取45只SPF小鼠分為4個試驗(yàn)組頸背部免疫接種

7、上述3種滅活苗，一免后間隔兩周二免，第4試驗(yàn)組為不免疫對照組，每個試驗(yàn)組再分為2個攻毒組（5只/組），分別腹腔感染Pm-C45、Pm-HG，另設(shè)一組為空白組。間接ELISA監(jiān)測小鼠抗體水平，記錄攻毒后兩周小鼠死亡情況并進(jìn)行病理學(xué)分析。結(jié)果顯示，二價滅活疫苗可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對Pm-HG和Pm-C45抗原的最高血清抗體效價分別為1：25600、1：12800；二價苗對Pm-HG、Pm-C45菌株攻毒的保護(hù)率分別為80%、100%；免疫后小鼠相

8、比未免疫小鼠表現(xiàn)更大的增重、較輕的病理損傷以及更高的生存率。
　　通過牛A型及B型P.multocida毒力評價、A型及B型P.multocida單價苗的免疫原性評價，成功篩選出Pm-C45為牛A、B型P.multocida二價滅活疫苗候選菌株。經(jīng)牛A、B型P.multocida二價滅活疫苗的評價，證明A、B型二價滅活苗較單價苗及未免疫對照組，能提供更好的雙重保護(hù)力，以抵抗牛A、B型P.multocida的攻毒。該二價苗有望成為高