多殺性巴氏桿菌lon缺失突變株的構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、C l a s s i f i e dI n d e x ：C o n f i d e n t i a l ( y e s ／n o ) ：n oC o d e ：1 0 2 2 4N 0 ：1 1 0 6 3 8 3D i s s e r t a t i o nf o r t h eM a s t e r D e g r e eC o n s t r u c t i o na n d B i o l o g i c a lC h a

2、r a c t e r i s t i c so f A ／o nS t r a i no f P a s t e u r e l l a m u l t o c i d aC a n d i d a t e ：W a n g S h u y aS u p e r v i s o r ：P r o f ．Q uL i a n d o n gD e g r e e C a t e g o r y ：M a s t e r o f A g

3、r i c u l t u r eC o l l e g e ：C o l l e g eo f V e t e r i n a r yM e d i c i n eF i r s tl e v e ld i s c i p l i n e ：V e t e r i n a r yM e d i c i n eS e c o n d l e v e ld i s c i p l i n e ：B a s i cV e t e r i n

4、 a r yM e d i c i n eH a r b i n C h i n aJ u n e 2 0 1 4東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文2 ．2 ．3 多殺I 生巴氏桿菌L o n 蛋白酶的A T P a s e 活性檢測(cè)???????????????1 62 ．2 ．4 自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建???????????????????????????．1 82 ．2 ．5 多殺性巴氏桿菌C 5 1 ．1 7 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備????

5、??????????．2 l2 ．2 ．6 自殺陛質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化??????????????????????????．．2 l2 ．2 ．7 突變株的篩選及鑒定??????????????????????????一2 22 ．2 ．8 突變株的生物學(xué)特性??????????????????????????．．2 32 ．2 ．9A l o n 突變株抗逆性實(shí)驗(yàn)?????????????????????????～2 32 ．2 ．1 0 突

6、變株的粘附特性實(shí)驗(yàn)?????????????????????????2 32 ．2 ．11 突變l 朱的致病性試驗(yàn)??????????????????????????2 43 結(jié)果與分析?????????????????????????????????．．2 53 ．1 L o n 蛋白酶的A T P a s e 活性檢測(cè)???????????????????????．2 53 ．1 ．1 重組表達(dá)質(zhì)粒p E T 3 0 a - L o

7、 n 的鑒定結(jié)果???????????????????．2 53 ．1 ．2 重組蛋白的表達(dá)、純化和w e s t e m b l o t 檢測(cè)結(jié)果???????????????一2 63 ．1 ．3 E L I S A 檢測(cè)L o n 蛋白多克隆抗體的效價(jià)結(jié)果????????????????2 73 ．1 ．4 L o n 蛋白酶A T P a S e 活性檢測(cè)??????????????????????．．2 73 ．2 I o n

8、 上下游同源臂的P C R 擴(kuò)增結(jié)果??????????????????????．．2 83 ．3 自殺性質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果?????????????????????????2 93 ．4 自殺性質(zhì)粒P B C ．A l o n 的電轉(zhuǎn)化及A ／o n 突變株的篩選結(jié)果?????????????3 03 ．4 ．1A l o n 突變株的P C R 鑒定結(jié)果???????????????????????．3 03 ．4 ．2A l o

9、n 突變株的生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果?????????????????????3 l3 ．4 ．3 突變株抗逆特性結(jié)果分析????????????????????????．．3 33 ．4 ．4A l o n 突變株的粘附試驗(yàn)結(jié)果????????????????????????3 43 ．4 ．5A l o n 對(duì)小鼠的致病性結(jié)果????????????????????????．．3 44 討論????????????????????????

10、???????????????????????．3 64 ．1 L o n 蛋白酶A T P a s e 檢測(cè)???????????????????????????3 64 ．2 細(xì)菌突變株構(gòu)建技術(shù)????????????????????????????3 64 ．3 細(xì)菌的牛長(zhǎng)特性及對(duì)細(xì)胞的粘附???????????????????????．3 75 結(jié)論????????????????????????????????????????