抗禽多殺性巴氏桿菌中藥組方的篩選及顆粒劑的研制.pdf

1、禽霍亂是由多殺性巴氏桿菌引起的一類(lèi)禽類(lèi)疾病，主要侵害家禽或野禽的接觸性疾病，又名禽巴氏桿菌病、禽出血性敗血癥。該病自然潛伏期一般2～9d，常呈現(xiàn)敗血性癥狀，發(fā)病率和死亡率很高，但也出現(xiàn)慢性或良性經(jīng)過(guò)。治療禽霍亂主要以西藥為主，雖然起到一定的治療效果，但西藥對(duì)家禽臟器有毒副作用，并且存在抗生索體內(nèi)殘留問(wèn)題。而天然中藥既避免了對(duì)動(dòng)物本身造成傷害，又不會(huì)造成藥物殘留。本實(shí)驗(yàn)從20味中藥中篩選出幾味抗菌活性較強(qiáng)的中藥，并進(jìn)行聯(lián)合抑菌實(shí)驗(yàn)，篩選出

2、有相加和協(xié)同作用的中藥組方評(píng)價(jià)其急性毒性和抗感染效果，并研制顆粒劑。主要內(nèi)容結(jié)果如下:
　　1.20味中藥有效成分的提取及其對(duì)多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性研究:采用超聲波、乙醇回流、水浴加熱等方法對(duì)20味中藥的有效成分進(jìn)行提取，將提取出來(lái)的有效成分對(duì)多殺性巴氏桿菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，測(cè)出中藥有效成分對(duì)多殺性巴氏桿菌的最小抑菌濃度（Minimal inhibitory concentration，MIC）和最小殺菌濃度(Minimal

3、 bactericidal concentration，MBC)，并通過(guò)棋盤(pán)法測(cè)定中藥有效成分對(duì)多殺性巴氏桿菌的聯(lián)合抑菌效果。結(jié)果顯示:艾葉、黃連、黃柏、秦皮、地榆、虎杖6種中藥提取物對(duì)多殺性巴氏桿菌的最低抑菌濃度值(MIC)為7.8mg/mL;赤芍、何首烏、茵陳、射干、甘草、蒲公英、白鮮皮7種中藥提取物的MIC值范圍在15.6～31.25mg/mL;金銀花、柴胡、板藍(lán)根、夏枯草、穿心蓮、知母、苦參7種中藥提取物的MIC值大于等于62.

4、5mg/mL。聯(lián)合抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，黃連與艾葉、黃柏與艾葉、秦皮與艾葉、虎杖與艾葉的聯(lián)合抑菌指數(shù)(Fractiona Inhibitory Concentration Index，F(xiàn)ICI)(FICI)≤0.5，黃柏與虎杖、秦皮與虎杖、黃連與虎杖的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≥2;秦皮與黃柏、地榆與黃柏的聯(lián)合抑菌指數(shù)(FICI)≥2。通過(guò)以上數(shù)據(jù)可以看出，黃連、黃柏、地榆、艾葉對(duì)多殺性巴氏桿菌均具有較好的體外抗菌活性;黃連與艾葉、黃柏與艾葉

5、、地榆與艾葉為相加或協(xié)同作用;地榆和黃柏為拮抗作用。最終篩選出黃連、黃柏和艾葉三味中藥進(jìn)行組方。
　　2.組方顆粒劑最佳提取工藝的研究:對(duì)中藥組方篩選出來(lái)的三味中藥黃連、黃柏和艾葉采用正交試驗(yàn)方法以浸膏得率、MIC和MBC作為評(píng)價(jià)指標(biāo)及數(shù)據(jù)處理的方差分析選出三味中藥的最佳提取工藝。最佳提取工藝結(jié)果為:黃連70％乙醇，料液比1∶12，提取次數(shù)2次，每次1小時(shí);黃柏70％乙醇，料液比1∶7，提取次數(shù)3次，每次80min;艾葉50％乙醇

6、，溫度70℃，提取時(shí)間2小時(shí)每次，料液比1∶30。
　　3.中藥組方提取物的急性毒性實(shí)驗(yàn)及其對(duì)人工感染多殺性巴氏桿菌的療效觀察:根據(jù)獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則，對(duì)中藥組方提取物進(jìn)行大鼠急性毒性試驗(yàn)，大鼠無(wú)任何反應(yīng)無(wú)死亡，即LD50＞5000mg/kg。同時(shí)用小鼠進(jìn)行多殺性巴氏桿菌造模，以中藥組方提取物對(duì)造模的小鼠進(jìn)行高、中、低劑量組的抗感染實(shí)驗(yàn)，小鼠按體重每10g給藥0.1ml。高劑量組存活率為80％;中劑量組存活率為80％;低劑量組存

7、活率為50％;對(duì)照組存活率20％。結(jié)論:中藥組方無(wú)毒;高、中劑量組對(duì)感染禽多殺性巴氏桿菌小鼠有一定抗感染活性，為中藥組方制劑的研發(fā)提供了理論依據(jù)。
　　4.組方顆粒劑的制備及其質(zhì)量控制:采用正交設(shè)計(jì)方法對(duì)組方顆粒劑的輔料:α—乳糖、可溶性淀粉和糊精按照不同比例進(jìn)行篩選，通過(guò)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和顆粒劑常規(guī)檢查建立其質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，并用高壓液相色譜和紫外分光光度計(jì)對(duì)小檗堿含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明:中藥組方藥液與輔料最佳配比為1∶5，色譜條件乙腈-