禽多殺性巴氏桿菌質(zhì)粒pC48-1和pX73序列測定與分析.pdf

1、本試驗從兩株禽源多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida，Pm)菌株C48-1和X73中提取和純化了內(nèi)源性質(zhì)粒，采用酶切克隆和引物步行測序策略測定了它們的基因全序列，其中pC48-1序列全長為2621bp，pX73序列全長為4220bp。 質(zhì)粒pC48-1和pX73的平均G+C含量分別為41.6％和42.8％，在整個序列中的分布都比較集中。pC48-1上存在6個正向重復(fù)序列和6個反向重復(fù)序列，pX73上存在6個正

2、向重復(fù)序列和12個反向重復(fù)序列，其長度都超過10bp。在質(zhì)粒pC48-1的兩條鏈上共發(fā)現(xiàn)有6個開放閱讀框(ORF)，質(zhì)粒pX73的兩條鏈上共發(fā)現(xiàn)有19個開放閱讀框，大多數(shù)閱讀框之間有相互交迭的現(xiàn)象。質(zhì)粒pC48-1和pX73的開放閱讀框在密碼子的使用上沒有明顯的GC偏向性，但編碼區(qū)GC含量較質(zhì)粒整個序列的GC含量明顯增加，其編碼區(qū)GC含量分別為49.66％和46.96％。 pC48-1上存在Acc65Ⅰ、BamHⅠ、BclⅠ、H

3、indⅢ、KpnⅠ、NheⅠ、ScaⅠ、StuⅠ和XbaⅠ共9個單酶切位點，在質(zhì)粒pX73上存在AceⅢ、ClaⅠ、HincⅡ、M.HindⅡ、NheⅠ和StuⅠ共6個單酶切位點。 同源性分析發(fā)現(xiàn)，與質(zhì)粒pC48-1和pX73核苷酸序列同源性很高的序列分別有15和14個，且都與多殺性巴氏桿菌P1059菌株質(zhì)粒pLEM核苷酸序列高度同源。pC48-1的6個推測ORF中，有5個ORF編碼的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)有不同程度的同源性，其

4、中ORF2和ORF4編碼的氨基酸序列與多殺性巴氏桿菌質(zhì)粒pLEM的轉(zhuǎn)運蛋白都有100％的同源性。pX73的19個推測ORF中，有13個ORF編碼的氨基酸序列與其它蛋白質(zhì)有不同程度的同源性，其中ORF7、ORF9、ORF13、ORF14、ORF15、ORF16、ORF17和ORF18編碼的氨基酸序列與豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌等的轉(zhuǎn)移蛋白A或B有90％以上的同源性。 因此，本研究工作通過兩株禽源Pm質(zhì)粒的基因全序列測定和分析，對將P