豬巴氏桿菌病滅活疫苗菌株的篩選.pdf

1、在中國豬巴氏桿菌病主要是由A型和D型多殺性巴氏桿菌引起，但國內(nèi)尚無同時含有A型和D型多殺性巴氏桿菌的疫苗，這給豬巴氏桿菌病的防控帶來極大困難。本研究以篩選的5株A型和5株D型豬源PM強毒菌株為研究對象，對其生化特征、生長特性、16S rRNA基因分子特征、藥敏試驗、毒力特性及免疫原性等生物學特性進行了系統(tǒng)研究。
　　革蘭染色鏡檢結(jié)果表明，10株P(guān)M強毒菌株的菌體形態(tài)一致，均為有莢膜、呈兩極深染的革蘭氏陰性短小桿菌。生長特性試驗結(jié)果

2、表明，不同菌株在含新生牛血清（終濃度5％）的TSA固體培養(yǎng)基上的生長速度有明顯差異，A型比D型生長速度快，培養(yǎng)36h后A型PM的菌落平均直徑為6.07mm，D型PM平均直徑為4.49mm。在TSB液體培養(yǎng)基中的生長曲線測定結(jié)果表明，5株A型和5株D型 PM的最高活菌含量分別介于2.4×109~4.3×109cfu/ml和2.8×109~5.5×109cfu/ml，均能高密度發(fā)酵培養(yǎng)。21種生化試驗的反應結(jié)果表明，10株P(guān)M的生化反應均不

3、一致，即使同一血清型的不同菌株之間也具有較大差別。
　　藥敏試驗結(jié)果表明10株多殺性巴氏桿菌強毒菌株對阿莫西林、頭孢噻肟、頭孢克洛、頭孢拉定、阿奇霉素、氯霉素、恩諾殺星、氧氟沙星和環(huán)丙沙星均高度敏感，其他11種抗生素的敏感性不同?；?6S rRNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹顯示，10株細菌與 PM多殺亞種標準株 HN06和禽殺亞種標準株 P1059聚為一簇，且置信度達98.6%。
　　基于16S rRNA基因構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹顯示

4、，10株細菌與 PM多殺亞種標準株 HN06和禽殺亞種標準株 P1059聚為一簇，且置信度達98.6%。16S rRNA基因的序列分析結(jié)果表明，16S rRNA基因非常保守，10株 PM之間的同源性均在99.8%以上；在1505bp序列中，僅存在第57bp（ T/C）、239bp（T/C）和376bp（G/C）處3個多態(tài)性位點，并且不具有型特異性。
　　小鼠毒力試驗結(jié)果表明，5株A型PM強毒菌株的小鼠LD50介于4~26 cfu，

5、5株D型 PM強毒菌株的小鼠LD50介于2.1×104~5.2×105cfu，A型PM強毒菌株的毒力明顯強于D型 PM強毒菌株。小鼠免疫試驗結(jié)果表明，綜合兩次免疫保護試驗的結(jié)果，A型多殺性巴氏桿菌中具有良好免疫保護力的3個菌株確定為 PM-31、PM-41和 PM-45。D型多殺性巴氏桿菌中具有良好免疫保護力的3個菌株依次為 PM-15、PM-35、PM-17。將這3株 A型和3株 D型多殺性巴氏桿菌作為進一步研究開發(fā)豬巴氏桿菌病二價滅