亞低溫對大鼠全身炎癥反應綜合征影響的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文亞低溫對大鼠全身炎癥反應綜合征影響的實驗研究姓名：張趣申請學位級別：碩士專業(yè)：兒科學指導教師：劉春峰2001.4.1材料與方法1、動物模型60只Wistar大鼠予3％戊巴比妥40mg／kg腹腔注射麻醉生效后，隨機分為正常對照組、內毒素組和亞低溫組。內毒素組和亞低溫組腹腔注射內毒素(20mg／kg)制成大鼠SIRS的動物模型。正常對照組腹腔注射等量生理鹽水。亞低溫組注射內毒素后立即給予亞低溫干預，向動物全身噴灑涼水

2、(4℃)，將多導生理記錄儀肛溫探針插人大鼠直腸中持續(xù)監(jiān)測肛溫，再通過調節(jié)室溫，輔以電熱毯和加熱燈，監(jiān)測亞低溫組動物肛溫維持于32330C之間。2、標本采集和處理各組于實驗1、2和3小時各取6只動物于無菌條件下取材，肺組織置于去RNA酶的Eppendoff管中一80℃凍存，待測TNF—OtmRNA。實驗3小時各組取8只動物剖開腹腔肝組織取材液氮中保存，待測腺苷酸及乳酸的含量。于剖腹前球后V叢取血lml，分離血清凍存，待測血清酶。同時留取肺

3、及肝組織置于25％戊二醛及二甲砷酸緩沖液中固定，進行透射電鏡觀察。3、實驗方法(1)應用逆轉錄暴合酶鏈反應(RT—PCR)方法研究TNF—d在SIRS大鼠肺組織分子水平的表達：用TRIZOL總RNA提取試劑提取肺組織mRNA，反轉錄合成cDNA的第一鏈，再經凝膠電泳成像及分析系統(tǒng)掃描PCR擴增產物，以B—action內參照標化TNF—n含量。(2)利用全自動生化分析儀生化方法檢測血清酶AI衛(wèi)、AST、ASP、LDH、CK各項指標的變化。