我國發(fā)現(xiàn)攜帶插入序列IS1203變種的志賀毒素2基因的大腸桿菌O157：H7.pdf

1、大連醫(yī)科大學碩士學位論文我國發(fā)現(xiàn)攜帶插入序列IS1203變種的志賀毒素2基因的大腸桿菌O157：H7姓名：羅霞申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：李芳20050601Oi57：H7均分離自江蘇羊糞標本，編號為9的l株大腸桿菌0157：H7分離白安徽豬糞標本。經(jīng)過核苷酸序列測定和序列比較分析發(fā)現(xiàn)，這種新型的志賀毒素2基因均有一長度為1313bp的插入片段，導致長度為1241bp的野生型志賀毒素2基因增長為2554bp。該插入片段包括一

2、長度為1310bp的插入序列(insertionsequence，IS)和因插入產(chǎn)生的長度為3bp的同向重復序列(directrepeat，DR)。除這段3bp的同向重復序列外，這三段長1310bp插入序列完全一致，與1999年日本報道的插入在志賀毒素2基因中的插入序列1203變種(insertionsequence1203variant，ISl203v)(stx2：：ISl203v)有100％的序列同源性。這是首次在我國發(fā)現(xiàn)攜帶stx

3、2：：ISl203v的大腸桿菌0157：H7菌株。此外，ISl203v在這3株菌的志賀毒素2基因中的插入位置各不相同，而且其中大腸桿菌02F044和9的ISl203v的開放性讀碼框與各自Stx2A、B亞單位的開放性讀碼框方向相反，另一株大腸桿菌9981l3的ISl203v的開放性讀碼框與Stx2A、B皿單位的開放性讀碼框方向相同。提示ISl203v的插入可能引起志賀毒素2的在產(chǎn)量或活性功能的改變。此外，對這3株攜帶stx2：：ISl20

4、3v的大腸桿菌0157：H7進行常規(guī)方法制備志賀毒素2并對其制備的產(chǎn)物進行HeLa、Vero細胞毒試驗分析，將測定HeLa、Vero細胞乳酸脫氫酶釋放量做為志賀毒素2細胞毒性的一個指示。我們發(fā)現(xiàn)這用這3株菌的志賀毒素2制備產(chǎn)物對HeLa和Vero細胞均能產(chǎn)生致細胞病變作用的形態(tài)學改變。志賀毒素2的制備產(chǎn)物對細胞乳酸脫氫酶釋放量的結(jié)果顯示，在18小時內(nèi)，大腸桿菌02F044、998113和9志賀毒素2的制備產(chǎn)物分別對HeLa細胞產(chǎn)生了25

5、16％、2608％、2607％的乳酸脫氫酶釋放量，比僅攜帶志賀毒素2的陽性對照菌株5162％的乳酸脫氫酶釋放量低；對Vero細胞分別為3115％、3031％、3132％，也低于陽性對照菌株4053％的乳酸脫氫酶釋放量。提示ISl203v的插入對志賀毒素2的活性有所影響。經(jīng)統(tǒng)計學分析顯示，3株菌志賀毒素2的制各產(chǎn)物對HeLa細胞乳酸脫氨酶釋放的值均低于僅攜志賀毒素2的大腸桿菌0157：H7陽性對照菌株(P005)；但對Vero細胞而言，3