聚己內酯囊管化骨髓間充質干細胞活性研究.pdf

1、目的: 分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞為研究對象，建立囊管化細胞的回收方法和囊管化細胞活性測定方法，研究聚己內酯半透膜囊管化對細胞活性的影響，探討半透膜影響細胞活性的機制，為聚己內酯半透膜免疫隔離移植技術的進一步研究和應用提供依據(jù)。 方法: 分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質干細胞，第三代細胞用于實驗研究。細胞懸液置聚己內酯半透膜管內，半透膜管兩端70℃熱夾閉封裝，細胞貼壁后0．25％胰酶消化回收細胞，測定不同消化時間對細胞活性和

2、回收率的影響。以添加10％胎牛血清的完全培養(yǎng)液平皿法細胞培養(yǎng)為對照組，設置3個實驗組進行聚己內酯囊管化骨髓間充質干細胞培養(yǎng)活性研究。 實驗組1：細胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝，完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，小分子營養(yǎng)物質能夠通過滲透有效補充； 實驗組2：細胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝，不含血清的基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)，血清小分子活性物質不能有效補充； 實驗組3：細胞以基礎培養(yǎng)液懸浮后封裝，完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，小分子營養(yǎng)物質能夠通過滲透補充，但細胞

3、缺乏血清大分子的營養(yǎng)。 囊管內細胞胰酶消化回收，以細胞計數(shù)、MTT法、CCK-8法測定細胞的活性，并進行生長曲線分析。以完全培養(yǎng)液平皿法細胞培養(yǎng)為對照組，設2個實驗組進行聚己內酯囊管化骨髓間充質干細胞移植細胞活性研究。兩個實驗組分別以完全培養(yǎng)液和基礎培養(yǎng)液懸浮細胞后封裝移植，囊管內細胞回收后以細胞計數(shù)、MTT法、CCK 8法測定細胞的活性，共8天，進行生長曲線分析。 結果: 分離培養(yǎng)得到典型的大鼠骨髓間充質干細胞，細胞活

4、性良好。70℃熱封裝及采用O．25％胰酶消化3分鐘對細胞無明顯損傷，活細胞超過95％，細胞回收率不低于97％的。完全培養(yǎng)液懸浮細胞封裝，以完全培養(yǎng)液培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞成活良好，細胞增殖率達到150％，低于對照組的210％。完全培養(yǎng)液懸浮封裝，基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)，骨髓間充質干細胞活性迅速下降，一周之內全部死亡；基礎培養(yǎng)液懸浮封裝，以完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，骨髓問充質干細胞活性下降，2 3天后逐漸上升，細胞增殖率低于10％，3個實驗組與對照組均具有

5、顯著性差異。異體移植實驗中，完全培養(yǎng)液懸浮和封裝后移植的骨髓間充質干細胞增殖率約為140％；較對照組200％為低，基礎培養(yǎng)液懸浮細胞封裝后細胞活性下降，其后逐漸上升，但增殖率低于10％，2個實驗組與對照組均具有顯著性差異。 結論: 建立了囊管化細胞的回收方法和以細胞回收為基礎的囊管化細胞活性測定方法，發(fā)現(xiàn)囊管化封裝對細胞培養(yǎng)與細胞移植均有一定的的抑制作用。血清中小分子活性物質對細胞具有重要的意義，是細胞存活和生長的關鍵。血清中大