耳聾相關(guān)的mtDNA新突變的篩選和臨床分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、聽力與語言是人類相互交流和認(rèn)識世界的重要手段，然而，耳病和聽力障礙的陰霾卻襲擾著人類。據(jù)世界衛(wèi)生組織估算，全世界有輕度聽力損失者近6億，中度以上的聽力損失者2.5億。我國有聽力障礙殘疾人2057萬，居各類殘疾之首，占全國人口的1.6％，其中7歲以下聾幼兒可達(dá)80萬，每年還將新產(chǎn)生聾兒3萬余名。耳聾是由遺傳和環(huán)境因素引起的，其中50％的耳聾患者是由遺傳因素造成的。由遺傳因素引起的耳聾包括綜合征型耳聾(占30％)和非綜合征型耳聾(占70％)

2、。非綜合征型耳聾可以根據(jù)不同的遺傳方式進(jìn)一步分為：常染色體隱性遺傳、常染色體顯性遺傳、X-連鎖遺傳和母系遺傳。據(jù)統(tǒng)計(jì)，超過30％的患者是由于使用氨基糖甙類抗生素，如鏈霉素、慶大霉素而致聾的。特別需要指出的是，在氨基糖甙類藥物性耳聾患病人群中，部分患者由于過量用藥致聾，而部分患者對氨基糖甙類藥物有超敏性。研究表明，線粒體tRNASer(UCN)基因?qū)е路蔷C合征型聽力損失的突變熱點(diǎn)區(qū)域之一。在這些非綜合征型聽力損失相關(guān)的突變位點(diǎn)中，多數(shù)位于

3、tRNA基因，如tRNASer(UCN) A7445G、7472insC、反密碼子莖上T7510C和T7511C突變等。因此，對線粒體tRNASer(UGN)基因突變引起的耳聾進(jìn)行研究，不僅是人類認(rèn)識自然和改造自然的一個(gè)重要方面，而且還具有重大的社會和經(jīng)濟(jì)意義。 本次研究的主要目的是發(fā)現(xiàn)耳聾相關(guān)的線粒體mtDNA新突變，并對攜帶這些突變的先證者及其家系進(jìn)行系統(tǒng)的臨床資料的收集，進(jìn)行分子遺傳學(xué)研究。我們的研究主要包括如下兩部分：

4、 第一部分：耳聾患者臨床資料的收集和耳聾相關(guān)的mtDNA新突變的篩選 本部分的研究對象是：我們在浙江地區(qū)10個(gè)地市聾啞學(xué)校的在校學(xué)生和溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院耳鼻喉科門診所收集的1641例雙側(cè)感音神經(jīng)性耳聾患者及306名來自溫州地區(qū)不同人群的聽力正常對照者。此部分研究的目的是篩查出可能與耳聾相關(guān)tRNASer(UCN)基因的新突變。研究中，收集病例的同時(shí)我們也對患者的臨床資料進(jìn)行系統(tǒng)整理，資料收集之前我們制訂了各種標(biāo)準(zhǔn)如：患

5、者的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)；聽力測定的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)；患者聽力損失分級的標(biāo)準(zhǔn)等。通過研究檢測到tRNASer(UCN)基因3個(gè)變異位點(diǎn)：1例7472delC變異；1例T7505C突變；6例C7492T突變。其中突變位點(diǎn)7472delC已見報(bào)道與耳聾和癲癇表型相關(guān)；進(jìn)化上較保守的C7492T和T7505C突變未見報(bào)道。顯然，C7492T突變的檢出率最高，為進(jìn)一步探討此突變與耳聾的關(guān)系，我們在此基礎(chǔ)上重點(diǎn)進(jìn)行了第二部分的研究。 第二部分：六個(gè)

6、同時(shí)攜帶T12338C和C7492T雙突變耳聾家系的遺傳特點(diǎn)分析 線粒體12S rRNA和tRNASer(UCN)基因是導(dǎo)致非綜合征型聽力損失的兩個(gè)突變熱點(diǎn)區(qū)域。在本研究中，我們收集了6個(gè)非綜合征型耳聾家系，這些家系同時(shí)攜帶ND5 T12338C和tRNASer(UCN) C7492T突變。臨床資料分析表明，該六個(gè)家系先證者對氨基糖苷類抗生素使用情況不一，但患者均以耳聾為唯一臨床表現(xiàn)，且先證者都為極重度雙側(cè)耳聾。先證者的線粒體全

7、序列分析表明，全線粒體基因組共有43個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，在這些多態(tài)位點(diǎn)中，除ND5 T12338C和tRNASer(UCN)C7492T突變外，在與耳聾相關(guān)的基因中未發(fā)現(xiàn)其它有功能意義的突變(如GJB2235delC等)。這表明mtDNA ND5 T12338C和tRNASer(UCN) C7492T突變可能是引起這些家系耳聾的重要原因。本研究將探討mtDNA ND5 T12338C和tRNAser(UCN)C7492T雙突變可能的致聾分子機(jī)制