MMP-13、MMP-14、Osteopontin、COX-2在脊索瘤中的表達及其意義.pdf

1、研究目的：脊索瘤是一種起源于胚胎殘余脊索組織的原發(fā)性惡性骨腫瘤,主要分布于人體中軸骨,生長緩慢、呈浸潤性生長,但也能發(fā)生緩慢轉(zhuǎn)移。 MMP-13屬于基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族的一員,作用底物廣泛,幾乎可降解細胞外基質(zhì)(ECM)及基膜的所有成份,其主要作用底物為膠原纖維Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、明膠、層粘連蛋白、aggrecan等。目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤中有MMP-13的表達,在腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。 MMP-14屬于基

2、質(zhì)金屬蛋白酶家族中的膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(MT-MMP),亦稱為MT1-MMP,位于細胞膜上。在人體組織中廣泛分布,作用底物包括膠原纖維Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、纖維粘連蛋白、硫酸皮膚素蛋白多糖、層粘連蛋白-Ⅰ、玻璃粘連蛋白等基質(zhì)成分,目前已報道人類各種腫瘤組織如胃癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腦瘤、肝癌等組織中MMP-14的表達均較良性組織增強,其過度表達可促進腫瘤的侵襲性生長。 骨橋蛋白(OPN)是一種磷酸化蛋白,在不同的組織細胞中均有發(fā)現(xiàn),如

3、腎、內(nèi)耳、蛻膜、胎盤、平滑肌、被激活的T細胞、巨噬細胞等。近年來研究表明,OPN在肺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、前列腺癌等腫瘤中均有過度表達,與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移潛能增加及腫瘤血管生成密切相關(guān)。 環(huán)氧化酶(COX)是前列腺素合成過程中的限速酶。在哺乳動物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)兩種同工酶COX-1和COX-2。近十年來,國外大量研究表明COX-2在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。主要通過影響細胞的生長增殖與分化、抑制細胞凋亡、促進腫瘤血管增

4、生、增強腫瘤細胞侵襲力、抑制機體免疫反應(yīng)等途徑參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。 本研究通過檢測MMP-13、MMP-14、Osteopontin、COX-2在脊索瘤中的表達,探討其在脊索瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的意義,可從多個方面闡明脊索瘤病因及為其診斷、治療提供新思路。 研究方法： 收集脊索瘤腫瘤組織標本及瘤周組織標本,構(gòu)建含94位點的組織芯片一張：應(yīng)用免疫組織化學方法檢測脊索瘤及其對照組織中MMP-13,MMP-14,O

5、steopontin,COX-2的表達；觀察MMP-13,MMP-14,Osteopontin,COX-2在腫瘤組織中表達的相關(guān)性；研究腫瘤組織中MMP-13,MMP-14,Osteopontin的表達與脊索瘤臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系；應(yīng)用Log-rank檢驗對脊索瘤腫瘤組織中MMP-13、MMP-14、Osteopontin蛋白表達作單因素分析,并繪制Kaplan-Meier生存曲線。 結(jié)果： 1.構(gòu)建一張組織芯片,含9

6、4位點,其中75位點為脊索瘤腫瘤組織,19位點為瘤周圍組織。 2.MMP-13、Osteopontin蛋白陽性著色定位于胞膜及胞漿,染色呈淡黃、棕黃或棕褐色。MMP-14蛋白陽性著色定位于胞膜,染色呈淡黃、棕黃或棕褐色。MMP-14、MMP-13、Osteopontin蛋白在脊索瘤腫瘤組織內(nèi)陽性表達率分別為78.6796、81.33％、61.33％。COX-2蛋白陽性著色可見于胞漿或(和)核膜,呈淡黃或棕黃色,其在脊索瘤腫瘤組織

7、內(nèi)陽性表達率為4％。MMP-13、MMP-14、Osteopontin蛋白陽性著色細胞大多呈片狀或彌漫分布,分布區(qū)域基本相同,對照組織中陽性細胞呈散在或片狀分布,且染色強度均弱于癌組織。統(tǒng)計結(jié)果表明MMP-13、MMP-14、Osteopontin在脊索瘤腫瘤組織與對照組織中的表達有顯著差異；而COX-2在脊索瘤腫瘤組織與對照組織中的表達無差異。 3.MMP-13與MMP-14在脊索瘤組織中的表達正相關(guān)；MMP-13與Osteo

8、pontin在脊索瘤組織中的表達正相關(guān)；MMP-14與Osteopontin在脊索瘤組織中的表達正相關(guān)；MMP-13、MMP-14、Osteopontin與COX-2在脊索瘤組織中的表達不相關(guān)。 4.對免疫組化結(jié)果加以研究并用統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),MMP-13蛋白在脊索瘤組織中的表達與脊索瘤發(fā)生的性別、年齡、部位及侵犯椎節(jié)數(shù)均無顯著關(guān)系；MMP-14蛋白在脊索瘤組織中的陽性表達與脊索瘤發(fā)生的性別、部位及侵犯椎節(jié)數(shù)均無顯著關(guān)系；MMP-

9、14蛋白在脊索瘤組織中的表達在脊索瘤發(fā)生的不同年齡階段組之間的差異有統(tǒng)計學意義；Osteopontin蛋白在脊索瘤組織中的表達陽性與脊索瘤發(fā)生的性別、年齡、部位及侵犯椎節(jié)數(shù)均無顯著關(guān)系。 5.經(jīng)Log-rank檢驗MMP-14、MMP-13蛋白陽性表達組患者無瘤生存期與MMP-14、MMP-13蛋白陰性表達組之間均存在顯著性差異；Osteopontin蛋白陽性表達組患者無瘤生存期與陰性表達組之間無顯著性差異。 結(jié)論：

10、 1.MMP-14、MMP-13、Osteopontin蛋白在脊索瘤組織中的表達水平明顯高于在正常組織中的表達,與脊索瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。 2.MMP-14、MMP-13及Osteopontin蛋白在脊索瘤組織中的表達兩兩之間呈正相關(guān),多個蛋白的相互作用導致了脊索瘤的惡性生長。 3.MMP-13、MMP-14、Osteopontin在脊索瘤中的表達與脊索瘤發(fā)生的性別、部位及侵犯椎節(jié)數(shù)無關(guān)。MMP-14在脊索瘤中的