重組可溶性Fas偶聯(lián)PKC抑制劑對(duì)裸鼠結(jié)直腸癌移植瘤殺傷作用的研究.pdf

1、結(jié)直腸癌根治性切除術(shù)后仍有較高的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率，嚴(yán)重影響患者長(zhǎng)期生存。近年研究證實(shí)，結(jié)直腸癌細(xì)胞中FasL增強(qiáng)表達(dá)是其逃避免疫監(jiān)視和殺傷并對(duì)化療藥物產(chǎn)生抗性，促進(jìn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一。本實(shí)驗(yàn)通過建立人直腸腺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型開展了重組可溶性Fas(sFas)偶聯(lián)PKC抑制劑對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞靶向殺傷作用的研究。 目的：用動(dòng)物模型驗(yàn)證重組可溶性Fas偶聯(lián)PKC抑制劑在裸鼠中對(duì)人體結(jié)直腸癌細(xì)胞的殺傷作用及轉(zhuǎn)移的抑制作用。尋找一條高選

2、擇性治療結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的最佳的治療方案。 方法：建立人結(jié)直腸癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型。荷瘤裸鼠的制備及分組：將多次裸鼠傳代的FasL陽性的人HR-8348腫瘤組織約0.01g(2×2×2mm31.25g/cm3)接種于4-5周BALB/C-nu/nu裸鼠盲腸壁，待瘤體生長(zhǎng)一周后，用隨機(jī)數(shù)字法將裸鼠分為4組，每組12只。Fas胞外區(qū)的克?。阂哉Ｈ送庵苎獑蝹€(gè)核細(xì)胞為模板，設(shè)計(jì)PCR引物，用RT-PCR方法擴(kuò)增Fas胞外區(qū)571bp。

3、將其插入pGEX-4T-1載體多克隆位點(diǎn)，經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定。制備sFas與PKC抑制劑偶聯(lián)物：將pGEX-4T-1-sFas轉(zhuǎn)化宿主菌BL21。采用GST融和蛋白純化法純化sFas。采用化學(xué)偶聯(lián)法(SPDP法)連接sFas與PKC抑制劑CalphostinC。荷瘤裸鼠治療試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)組(sFas偶聯(lián)PKC抑制劑+5-FU)：對(duì)每個(gè)腫瘤于第0、4、8、12、16天腹腔注射100μ1(3mg/ml)sFas偶聯(lián)PKC抑制劑+0.5mg5-FU

4、。單純sFas偶聯(lián)PKC抑制劑治療組：除不進(jìn)行5-FU治療外余同實(shí)驗(yàn)組。單純5-FU治療組：除不進(jìn)行sFas偶聯(lián)PKC抑制劑治療外余同實(shí)驗(yàn)組?？瞻讓?duì)照組：生理鹽水100ul于第0、4、8、12、16注射。于治療后第21天拉頸法處死各組裸鼠。測(cè)量裸鼠的原位種植腫瘤的重量，計(jì)算瘤重抑制率及凋亡指數(shù)(AI)計(jì)算肝轉(zhuǎn)移發(fā)生率及腹水出現(xiàn)情況。 結(jié)果：(1)對(duì)照組、單純5-FU治療組、單純sFas偶聯(lián)PKC抑制劑治療組、sFas偶聯(lián)PKC抑

5、制劑+5-FU組抑瘤率分別為0、43.1％、79.9％、86.3％；腹膜轉(zhuǎn)移率分別為100％、45.5％、16.7％、8.3％；肝轉(zhuǎn)移率分別為83.3％、36.4％、16.7％、0。單純sFas偶聯(lián)PKC抑制劑治療組、sFas偶聯(lián)PKC抑制劑+5-FU組結(jié)直腸癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移受到明顯抑制(P＜0.05)，尤以sFas偶聯(lián)PKC抑制劑+5-FU組最明顯(P＜0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，重組可溶性Fas偶聯(lián)PKC抑制劑對(duì)裸鼠結(jié)直