日本毛連菜和細(xì)辛的生藥學(xué)研究.pdf

1、日本毛連菜(Picris japonica Thunb.)隸屬菊科毛連菜屬(Picris L.)，又名槍刀菜，主要分布在我國河北、山西、吉林、黑龍江等地。日本毛連菜全草入蒙藥，具有清熱、消腫及止痛作用，主治流感、乳癰。目前，關(guān)于日本毛連菜的化學(xué)成分研究有一些相關(guān)報道[2～8]，有關(guān)生藥學(xué)的研究報道很少。為了建立日本毛連菜顯微鑒定方法，為日木毛連菜的顯微鑒定提供依據(jù)，本文采用顯微鑒定和掃描電鏡技術(shù)，對日本毛連菜根、莖、葉、果實進(jìn)行組織鑒定

2、，對全草進(jìn)行粉末鑒定，并對花粉和果實進(jìn)行了表面微形態(tài)觀察。其研究結(jié)果如下：
　　 1、日本毛連菜的顯微結(jié)構(gòu)。①根橫切面，表皮細(xì)胞一列，老根外側(cè)有木栓層數(shù)列，有節(jié)乳汁管散在分布于韌皮部中，髓射線明顯。②莖橫切面，表皮細(xì)胞一列，表皮上有腺毛和非腺毛，內(nèi)皮層明顯。③葉橫切面，表皮由1列細(xì)胞構(gòu)成，柵欄組織細(xì)胞為1～2列，不通過主脈，主脈維管束1～5個，外韌型，大小相間，略呈半環(huán)狀排列。④葉表皮形態(tài)，上、下表皮均有非腺毛、腺毛和氣孔分布，

3、上表皮細(xì)胞垂周壁較平直，下表皮細(xì)胞垂周壁波狀彎曲；氣孔為不等式或不定式，副衛(wèi)細(xì)胞多為4～6個。⑤日本毛連菜地上部分被覆的非腺毛的頂端由2個細(xì)胞特化為分叉鉤狀，細(xì)胞壁增厚明顯，基部由多個縱向伸長的細(xì)胞構(gòu)成；腺毛有兩種。⑥花粉粒刺狀紋飾，有三個萌發(fā)孔。⑦全草粉末觀察，多見非腺毛2個分叉的頂端碎片和腺毛多細(xì)胞的頭部；花粉粒常見，類圓形，外壁有刺狀突起，有三個萌發(fā)孔；導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管和具緣紋孔導(dǎo)管；斷碎的冠毛較多；乳汁管為有節(jié)乳汁管。
　

4、　 2、花粉和果實的表面微形態(tài)。花粉粒外壁刺狀紋飾基部粗大，刺狀突起呈環(huán)形排列或數(shù)個密集成群；網(wǎng)眼小且深，大小、形狀相近；萌發(fā)孔三個，具大型瘤狀突起，瘤狀突起為腦紋狀紋飾。果實有5～10余條高起的縱肋和5條較深的縱溝，縱溝貫穿果實兩端，縱溝內(nèi)有較多指狀突起。外果皮細(xì)胞狹長形、先端呈游離的指狀突起，游離部分呈層疊環(huán)繞果實排列。果實兩頂端側(cè)面觀和俯面觀特征明顯，一端俯面觀呈五瓣花形；另一端俯面觀呈五角星形，中間有孔，表面有許多長條狀細(xì)胞緊

5、密排列而成。
　　 上述顯微結(jié)構(gòu)和掃描電鏡微形態(tài)特征的觀察，為日本毛連菜的生藥鑒定提供了重要的依據(jù)。
　　 細(xì)辛是常用中藥，來源于馬兜鈴科細(xì)辛屬Asarum植物北細(xì)辛A.heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.、漢城細(xì)辛A.sieboldii Miq.var.seoulense Nakai或華細(xì)辛A.sieboldii Miq.干燥的根和根莖，具多

6、種功效，主治風(fēng)寒感冒、頭痛牙痛等病癥[15]。華細(xì)辛廣泛分布于黃河和長江流域，其中，陜西華陰的藥材歷來皆被認(rèn)為品質(zhì)最佳。然而，實際上卻缺乏有效的依據(jù)。本文通過揮發(fā)油含量及其化學(xué)成分的分析，對華細(xì)辛揮發(fā)性成分的地區(qū)性差異進(jìn)行了比較。
　　 細(xì)辛具一定毒性，自古已有很多記載，然而迄今為止，對于細(xì)辛毒性的表現(xiàn)形式、毒性成分以及致毒機(jī)制，仍缺乏深入了解。本文較為系統(tǒng)地比較了細(xì)辛常用劑型水煎劑、散劑和復(fù)方制劑(麻黃附子細(xì)辛湯)對SD大鼠的

7、腎、肝、肺、胃、腸等重要臟器的毒害作用。
　　 結(jié)果如下：
　　 1、揮發(fā)油含量及其化學(xué)成分分析。測定了浙江、江西、安徽、山東、湖南、湖北、四川、重慶、陜西等省市25個樣點(diǎn)華細(xì)辛的葉和根及根莖中揮發(fā)油的含量，比較了其揮發(fā)性成分絕對含量與組成差異。
　　 ①華細(xì)辛根及根莖的揮發(fā)油含量均值為2.87％，而葉的揮發(fā)油含量均值為0.23％，可見，華細(xì)辛葉中揮發(fā)油含量遠(yuǎn)低于根及根莖中揮發(fā)油含量。
　　 ②不同產(chǎn)地間

8、華細(xì)辛揮發(fā)油含量有顯著性差異(P＜0.05)，其部分成分如α-蒎烯、香檜烯、β-蒎烯、松油烯、桉葉素、γ-蒎烯、4-萜品醇、α-松油醇、3,5-二甲氧基甲苯、黃樟醚、甲基丁香酚、肉豆蔻醚等含量也存在顯著性差異(P＜0.05)，莰烯、月桂烯、α-水芹烯、對-聚傘花素等成分的含量無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2、細(xì)辛的毒性與其劑型劑量有密切相關(guān)性。細(xì)辛水煎劑和復(fù)方制劑麻黃附子細(xì)辛湯在細(xì)辛生藥量0.625 g·kg-1·d-1

9、(6g/人)和3.125 g·kg-1·d-1(30g/人)的劑量下，各項生化指標(biāo)與空白對照組比較，均無顯著性差異，腎臟組織切片亦無病理形態(tài)學(xué)變化。麻黃附子細(xì)辛湯在細(xì)辛生藥量增加至6.25 g·kg-1·d-1(60g/人)時，大鼠表現(xiàn)出輕度腎臟損傷。細(xì)辛散劑在0.94 g·kg-1·d-1(9g/人)的劑量下，大鼠血清肌酐明顯偏高，腎臟和肝臟中度損傷，肺臟輕度損傷；在2.81 g·kg-1·d-1(27g/人)的劑量下，大鼠陸續(xù)死亡，

10、腎、肝和肺等臟器重度損傷?？梢姡诖笫笾?，細(xì)辛的毒性主要表現(xiàn)在腎、肝、肺等臟器損傷，對腸、胃等臟器無損傷。細(xì)辛散劑的毒性顯著強(qiáng)于水煎劑和復(fù)方制劑麻黃附子細(xì)辛湯。
　　 3、針對華細(xì)辛采用改良的CTAB法，建立了適于AFLP分析的華細(xì)辛基因組DNA的提取方法。結(jié)果表明：采用含2％CTAB，2mol/LNacl，1uLβ-琉基乙醇的DNA提取液，酚氯仿抽提兩次，所提取華細(xì)辛的基因組DNA純度高、基本無降解，適于AFLP分析要求。對華

11、細(xì)辛AFLP反應(yīng)體系進(jìn)行初步研究，得出較適合華細(xì)辛AFLP分析的體系。25 uL酶切體系中加入基因組DNA500 ng，EcoRI10 U，MseⅠ5 U，37℃酶切3 h。12.5 uL連接反應(yīng)體系中加入MseⅠ adaptor25 pmol，EcoRⅠ adaptor2.5 pmol，T4DNA ligase175 U，酶切產(chǎn)物10μL，在16℃連接過夜(12h～16h)。預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物稀釋150倍進(jìn)行選擇性擴(kuò)增。8 uL選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物加