肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素誘導(dǎo)兔咬肌萎縮試驗(yàn)及臨床研究.pdf

1、第一章肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素誘導(dǎo)兔咬肌萎縮試驗(yàn) 目的 探討肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素誘導(dǎo)兔咬肌萎縮的可行性及咬肌的大體形態(tài)改變。 方法 選擇健康成年新西蘭白兔100只，隨機(jī)分為4組，每組25只，其中1組為正常對(duì)照組，不做任何處理，另外3組分別進(jìn)行①肉毒毒素試驗(yàn)(B組)、②曲安奈德試驗(yàn)(T組)和③曲安奈德+肉毒毒素(BT組)。每只實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物均取一側(cè)咬肌作為試驗(yàn)肌，對(duì)側(cè)咬肌作自身陰性對(duì)照，試驗(yàn)咬肌內(nèi)分別注

2、射配制好的肉毒毒素A、曲安奈德或曲安奈德+肉毒毒素，聯(lián)合用藥劑量是單獨(dú)用藥劑量的1/2。對(duì)側(cè)咬肌內(nèi)注射等量生理鹽水。分別于藥物注射后2、4、8、12、24周時(shí)進(jìn)行咬肌取材，每次各組均取5只，完整切取雙側(cè)咬肌，稱新鮮咬肌濕重，并留取部分咬肌組織備查，手術(shù)前應(yīng)用B超于活體上測(cè)量咬肌厚度。觀察記錄咬肌大體形態(tài)、厚度、濕重。 結(jié)果 1.大體觀察：實(shí)驗(yàn)咬肌基本形態(tài)正常，實(shí)驗(yàn)側(cè)咬肌組織形態(tài)、色澤、彈性、質(zhì)地等均與正常對(duì)照組和陰性自身

3、對(duì)照咬肌無(wú)明顯差別。 2.咬肌厚度：不同時(shí)間內(nèi)正常組與各試驗(yàn)組的陰性對(duì)照側(cè)間經(jīng)隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析結(jié)果顯示差異無(wú)顯著性意義(P≥0.138)，注射生理鹽水不會(huì)造成陰性對(duì)照側(cè)咬肌厚度改變。各試驗(yàn)組的陰性對(duì)照側(cè)咬肌厚度與試驗(yàn)側(cè)間經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)有顯著性差異(P均為0.000)，咬肌內(nèi)注射肉毒毒素、注射曲安奈德或聯(lián)合注射均可引起咬肌厚度的改變，試驗(yàn)側(cè)咬肌厚度明顯減小。 3.咬肌濕重：不同時(shí)間內(nèi)正常組與B、T、BT三組的陰性對(duì)照側(cè)咬肌濕

4、重間差異均無(wú)顯著性(P≥0.103)，局部注射生理鹽水不會(huì)造成咬肌濕重改變。各試驗(yàn)組內(nèi)試驗(yàn)側(cè)與陰性對(duì)照側(cè)間差異有顯著性(P≤0.005)，試驗(yàn)藥物均引起咬肌濕重的改變，試驗(yàn)側(cè)咬肌濕重減小。以各試驗(yàn)組內(nèi)試驗(yàn)側(cè)與陰性對(duì)照側(cè)的濕重差值進(jìn)行析因方差分析，組間差異有顯著性意義(F=7287.537，P=0.000)，時(shí)間差異有顯著性意義(F=202.981，P=0.000)，時(shí)間與組別問(wèn)有交互作用(F=192.184，P=0.000)。

5、結(jié)論 曲安奈德、肉毒毒素或聯(lián)合用藥均可引起所注射咬肌的萎縮，聯(lián)合用藥產(chǎn)生的肌萎縮效果最明顯，兩種藥物單獨(dú)注射產(chǎn)生的肌萎縮效果無(wú)顯著差別。 第二章曲安奈德及肉毒毒素對(duì)兔咬肌的組織學(xué)影響 目的 探討肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素后咬肌的組織學(xué)、酶組織化學(xué)變化。 方法 咬肌取材標(biāo)本分別進(jìn)行1.HE染色冷凍切片組織學(xué)檢查。2.三磷酸腺苷酶染色冷凍切片光鏡觀察。3.還原型輔酶Ⅰ-四唑氮還原酶染色切片光鏡

6、觀察。4.酶組化染色切片的圖像測(cè)量分析。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以-x±s表示，采用隨機(jī)設(shè)計(jì)資料方差分析及配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.組織學(xué)檢查結(jié)果： HE染色切片檢查顯示各試驗(yàn)咬肌基本組織結(jié)構(gòu)與對(duì)照組間無(wú)明顯差異，肌纖維排列整齊，肌纖維變細(xì)，細(xì)胞核位于肌膜下，未見細(xì)胞壞死、變性等病理改變。縱切面肌節(jié)完整清晰，橫切面輪廓基本正常，部分輪廓不

7、規(guī)則。 2.酶組織化學(xué)檢查結(jié)果： ATP酶染色切片光鏡下檢查，兔咬肌組織中含Ⅰ、Ⅱ(Ⅱa、Ⅲb)型肌纖維，兩種纖維相互混合，肌纖維由大到小依次為Ⅱb型纖維、Ⅱa型纖維、Ⅰ型纖維。試驗(yàn)咬肌Ⅱ型肌纖維面積較對(duì)照組明顯減小，其中以Ⅱb型纖維面積的減小更加顯著，而Ⅰ型肌纖維無(wú)明顯改變。 3.圖像分析結(jié)果： Ⅰ型肌纖維：各時(shí)間點(diǎn)內(nèi)正常組及各實(shí)驗(yàn)組的陰性對(duì)照側(cè)間無(wú)顯著性差異(P≥0.963)，注射生理鹽水不會(huì)造成咬肌

8、Ⅰ纖維的截面積改變。各試驗(yàn)組內(nèi)陰性對(duì)照側(cè)與試驗(yàn)側(cè)間經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，也無(wú)顯著性差異，(P≥0.412)，藥物注射也不會(huì)造成咬肌Ⅰ型纖維的截面積改變。 Ⅱa型肌纖維：所有時(shí)間水平的正常組與各試驗(yàn)組的陰性對(duì)照側(cè)間無(wú)顯著差異(P≥0.963)，認(rèn)為注射生理鹽水不會(huì)引起Ha型肌纖維改變；各試驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)側(cè)與陰性對(duì)照側(cè)問(wèn)有顯著性差異(P≤0.041)，三種試驗(yàn)方法均可引起Ⅱa型肌纖維面積的改變，實(shí)驗(yàn)側(cè)咬肌纖維面積減小。 Ⅱb型肌纖維：各

9、時(shí)間內(nèi)正常組與各試驗(yàn)組的陰性對(duì)照側(cè)間差異無(wú)顯著性意義(P≥0.982)，陰性對(duì)照側(cè)Ⅱb型肌纖維面積無(wú)明顯改變；各試驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)側(cè)與陰性對(duì)照側(cè)間均有顯著性差異(P≤0.005)，說(shuō)明三種方法均可引起Ⅱb型肌纖維面積的改變，試驗(yàn)側(cè)Ⅱb型肌纖維面積減小。 從時(shí)間變化趨勢(shì)看，Ⅱa和Ⅱb肌纖維面積在8～12周之前呈進(jìn)行性下降趨勢(shì)，第12周至第24周無(wú)明顯變化，24周時(shí)B、T、BT三組試驗(yàn)側(cè)肌纖維Ⅱb型約為陰性對(duì)照側(cè)咬肌纖維面積的51.41％

10、、47.94％、46.54，Ha型纖維面積減小沒(méi)有Ⅱb型纖維明顯，至第24周時(shí)Ⅱa型纖維面積約為對(duì)照側(cè)的78.24％、78.09％、77.49％。 結(jié)論 常規(guī)組織學(xué)檢查顯示試驗(yàn)咬肌組織基本正常。試驗(yàn)因素不改變Ⅰ型肌纖維面積，但會(huì)使Ⅱa和Ⅱb型肌纖維萎縮，Ⅱb型肌纖維萎縮較Ⅱa型纖維更加明顯。肌纖維面積變化趨勢(shì)是肌纖維面積在8～12周之前持續(xù)減小，之后至24周前無(wú)明顯變化。 第三章曲安奈德及肉毒毒素對(duì)咬肌細(xì)胞超微結(jié)

11、構(gòu)的影響 目的 探討肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素誘導(dǎo)肌萎縮后肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變 方法 兔咬肌內(nèi)注射曲安奈德、肉毒毒素或聯(lián)合注射兩種藥物后，分別于第2、4、8、12、24周切取咬肌組織標(biāo)本，用3％戊二醛固定，制備超薄切片，醋酸鈾和檸檬酸鉛染液雙染色，電子顯微鏡下進(jìn)行觀察。 結(jié)果 對(duì)照組：肌原纖維、肌節(jié)、肌管系統(tǒng)等結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，細(xì)胞核位于肌膜下，線粒體均勻分布在肌原纖維之間。正常對(duì)照組與

12、陰性對(duì)照組咬肌未見明顯差別。 聯(lián)合試驗(yàn)組：肌節(jié)結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，其間線粒體增多，肥大腫脹，部分線粒體嵴變短、減少、紊亂或消失，糖元顆粒增多；肌原纖維變細(xì)。 三組試驗(yàn)的共同超微結(jié)構(gòu)變化是線粒體增多，腫脹變形，線粒體嵴減少、變短或消失，肌漿內(nèi)糖原增多。 結(jié)論 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化可能在一定程度上反映了肌細(xì)胞能量代謝、糖代謝和蛋白代謝的改變。肌原纖維蛋白代謝增加，合成減少；線粒體增多可能是代償性地加強(qiáng)有有氧呼吸

13、的結(jié)果，之后線粒體嵴減少、紊亂、消失，可能是有氧代謝失代償?shù)谋憩F(xiàn)；糖原顆粒增多可能是糖原代謝障礙障礙的結(jié)果，糖原合成增加、分解減少，造成肌漿內(nèi)糖原顆粒堆積。 第四章曲安奈德及肉毒素治療咬肌肥大的臨床研究 目的 探討肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素治療咬肌肥大的臨床效果，及其對(duì)咬合功能的影響。 方法 選擇單純性良性咬肌肥大或下頜角整形術(shù)后仍顯咬肌肥大的患者10人，隨機(jī)分為兩組分別接受曲安奈德或肉毒毒素咬肌

14、內(nèi)注射治療，分別于治療前和治療后1周、1月、3月、6月測(cè)量最大咬合力及開口度，治療前及治療后3、6個(gè)月應(yīng)用B超測(cè)量咬肌厚度。 結(jié)果 治療后面部輪廓改善，肥大的咬肌萎縮明顯，形態(tài)效果滿意。 1.咬合力：兩種藥物對(duì)咬合力的影響差異有顯著性(F=34.876，P=0.000)，肉毒毒素對(duì)咬合力的影響較曲安奈德明顯；組內(nèi)效應(yīng)及交互效應(yīng)比較，重復(fù)測(cè)量5個(gè)不同時(shí)期測(cè)量咬合力間有顯著性差異(F=222.128，P=0.000)

15、，狀態(tài)與藥物間有交互作用(F=7.186，P=0.000)，多重比較治療前及治療后不同時(shí)間咬合力間均有顯著性差異(P≤0.037)。 2.開口度：兩組間差異無(wú)顯著性差異(F=0.002，P=0.964)；組內(nèi)效應(yīng)及交互效應(yīng)比較，重復(fù)測(cè)量5個(gè)不同時(shí)間的開口度間差異無(wú)顯著性(F=1.037，P=0.403)，藥物與狀態(tài)間無(wú)交互作用(F=2.487，P=0.063)。治療對(duì)最大開厚度均無(wú)影響。 3.咬肌厚度：兩藥的治療效果差異

16、無(wú)顯著性意義(F=0.225，P=0.641)。重復(fù)測(cè)量3個(gè)不同狀態(tài)間有顯著性差異(F=512.479，P=0.000)，治療后咬肌厚度逐漸減??；狀態(tài)與藥物間無(wú)交互作用(F=1.698，P=0.197)。多重比較治療前及治療后不同時(shí)間間均有顯著性差異(P均為0.000)，兩種藥物治療后咬肌厚度均明顯減小。 結(jié)論 治療對(duì)開口度無(wú)影響，對(duì)咬合力有明顯影響，肉毒毒素較曲安奈德對(duì)咬合力的影響更顯著。兩種藥物均可使咬肌厚度減小，兩

17、者效果無(wú)顯著性差異。 全文結(jié)論 本研究首次提出并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究探討了糖皮質(zhì)激素治療骨骼肌肥大的可行性，并進(jìn)一步了解了糖皮質(zhì)激素及肉毒毒素注射后咬肌組織學(xué)、酶組織化學(xué)和超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果顯示咬肌內(nèi)注射曲安奈德及肉毒毒素均可產(chǎn)生明顯的肌萎縮效果，組織學(xué)及酶組化研究顯示典型的Ⅱ型肌纖維萎縮，Ⅰ型肌纖維無(wú)明顯改變。咬肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變主要表現(xiàn)為早期細(xì)胞內(nèi)線粒體增多肥大、糖原顆粒增多及肌原纖維變細(xì)。聯(lián)合注射糖皮質(zhì)激素與肉