山茱萸中熊果酸的提取分離及其抗氧化活性研究.pdf

1、安徽省石臺縣有豐富的山茱萸資源。山茱萸作為我國傳統(tǒng)的名貴中藥，具有多種化學(xué)成分和藥理作用，故具有廣闊的開發(fā)前景。為了充分有效地利用山茱萸資源，本論文對安徽地區(qū)山茱萸的基本成分進(jìn)行測定，研究了山茱萸中活性物質(zhì)熊果酸的提取和純化工藝，同時(shí)探討熊果酸的體外抗氧化作用和動(dòng)物抗衰老作用。為進(jìn)一步了解山茱萸藥材的藥理作用、開發(fā)山茱萸藥材提供了一定的理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)測定山茱萸果實(shí)中還原糖、總糖、總有機(jī)酸、氮、粗蛋白、粗纖維、熊果酸和齊墩

2、果酸的含量，含量分別為8.362％、16.37％、6.28％、0.4324％、2.7025％、2.32％、0.2722％、0.18％。
　　 采用同時(shí)蒸餾萃取(SDE)提取山茱萸中的揮發(fā)油，用氣相色譜－質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)對提取出的揮發(fā)油進(jìn)行定性與定量分析，并對文獻(xiàn)中測定揮發(fā)油的色譜條件等進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果從山茱萸揮發(fā)油中共鑒定出48種主要化合物。含量最高的是棕櫚酸(28.86％)，其次是亞麻酸甲酯(10.82％)。已定性的組

3、分峰面積之和占總色譜峰面積的91.54％。
　　 通過薄層色譜對山茱萸果實(shí)提取物進(jìn)行定性鑒別，發(fā)現(xiàn)果實(shí)提取物在與熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品相同Rf值的地方出現(xiàn)了相同的紫色斑點(diǎn)。
　　 采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)對山茱萸中的熊果酸進(jìn)行超聲波提取工藝優(yōu)化，并進(jìn)一步用石油醚和四氯化碳對提取液進(jìn)行除雜。研究結(jié)果表明，用超聲波輔助法提取熊果酸的純度最高的工藝條件為：80％乙醇，料液比1∶20，提取時(shí)間15min，提取溫度35℃。得率最高的工藝條件為：

4、95％乙醇，料液比1∶10，提取時(shí)間25min，提取溫度35℃。適宜的除雜辦法為石油醚洗脫3次，用量為0.2倍于提取液的體積；四氯化碳洗脫3次，用量為0.3倍于提取液的體積。得到粗提液中熊果酸純度為51.52％。然后采用大孔吸附樹脂對山茱萸中熊果酸進(jìn)行吸附分離純化，最終得到純度為79.2％的熊果酸。
　　 采用化學(xué)反應(yīng)法，檢測山茱萸中的熊果酸對鄰苯三酚自氧化反應(yīng)產(chǎn)生的超氧陰離子、Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基和DPPH自由基的清

5、除作用；將昆明種雄性小鼠隨機(jī)分為空白組、衰老模型組、陽性對照組、低劑量組和高劑量組，每組10只。給藥42d后，摘眼球取血，檢測小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平，并測定其胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。結(jié)果表明：熊果酸具有清除羥基自由基、超氧陰離子自由基和DPPH自由基的作用，可顯著提高小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量、降低丙二醛(MDA)含量，顯著提高小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)(P＜0.05)。由此表明，熊果酸具有明