肺泡細(xì)胞表面液體清除能力在急性重癥胰腺炎中變化規(guī)律的研究.pdf

1、目的： 急性胰腺炎導(dǎo)致的肺臟水腫主要是表現(xiàn)為肺泡腔內(nèi)的液體量增多?，F(xiàn)代觀點(diǎn)認(rèn)為肺臟水腫主要是肺泡表面的水清除能力的發(fā)生障礙，當(dāng)肺泡清除液體的能力下降，導(dǎo)致肺臟水腫的發(fā)生。在低血容量休克，感染性休克等外科病理過程中驗(yàn)證了這一規(guī)律。因此本研究大膽提出假設(shè)：在急性重癥胰腺炎中肺臟存在肺泡液體清除能力的異常改變。為了驗(yàn)證這個(gè)假設(shè)，通過對急性重癥胰腺炎(SAP)Sprague—Dawley大鼠模型的肺臟進(jìn)行觀察研究，以期發(fā)現(xiàn)SAP中的肺臟

2、液體清除能力(AFC)的變化規(guī)律，及與肺泡細(xì)胞表面Na—K—ATP酶和Na離子通道(ENaC)相關(guān)性。解決以下問題：1.急性重癥胰腺炎大鼠的肺臟是否發(fā)生肺臟水清除能力(AFC)的改變？2.AFC的改變與哪種肺泡表面的腎上腺能受體相關(guān)？AFC受哪些因素調(diào)節(jié)？3，SAP肺臟中ENaC和Na—K—ATP酶的數(shù)目是否發(fā)生變化？ 材料和方法： 一、誘發(fā)急性重癥胰腺炎(SAP)的SD大鼠模型 選取健康的SD大鼠，隨機(jī)分為造模

3、組(SAP組)，假手術(shù)組(sham組)和對照組(control組)。造模組大鼠麻醉后開腹經(jīng)十二指腸壁行胰膽管插管后，用5％?；悄懰?.2ml向胰膽管內(nèi)逆行注射的方法制作急性重癥胰腺炎(SAP)大鼠模型；假手術(shù)組大鼠僅開腹翻動十二指腸；另建立對照組無任何處置。觀察SAP術(shù)后4小時(shí)，24小時(shí)，48小時(shí)的大鼠癥狀，胰腺形態(tài)和腹腔情況，血清中淀粉酶和脂肪酶水平的測定，胰腺和肺臟的病理改變，繪制SAP時(shí)間—生存曲線。 二、觀察SAP肺臟水

4、清除能力(AFC)在急性重癥胰腺炎中的變化 將手術(shù)組(SAP組)大鼠，對照組和假手術(shù)組麻醉后，氣管切開法插管，再分別放血法處死后，將雙側(cè)肺臟取出注入已經(jīng)預(yù)熱(37℃)的5％的蛋白溶液4ml。肺臟立即放入37℃水浴箱內(nèi)，通100％純氧1小時(shí)，全部吸出肺臟中的蛋白溶液，分別測定通氣前和通氣后的蛋白溶液濃度，帶入公式計(jì)算出不同時(shí)間段SAP組，對照組和假手術(shù)組中肺泡主動清除液體能力(AFC)值。 三、觀察SAP肺泡腎上腺素受體對

5、肺臟水清除能力的影響 在AFC升高最明顯的4h時(shí)間段，分別在注入肺臟內(nèi)蛋白溶液中預(yù)先加入prazosin(α1腎上腺受體阻滯劑)、yohimbine(α2腎上腺受體阻滯劑)、prazosin+yohimbine、propranolol(β腎上腺受體阻滯劑)，然后再將肺臟放入37℃水浴箱內(nèi)，通100％純氧1小時(shí)，全部吸出肺臟中的蛋白溶液，分別測定通氣前和通氣后的蛋白溶液濃度，帶入公式計(jì)算處各組的肺泡主動清除液體能力(AFC)值。觀

6、察不同的肺泡表面的腎上腺受體與升高的肺泡主動液體清除能力的關(guān)系。 四、觀察SAP內(nèi)源性兒茶酚胺對肺臟水清除能力的的影響 先行手術(shù)將大鼠雙側(cè)腎上腺切除，后立即進(jìn)行牛黃膽酸的逆行性注射，制造出SAP。測定4小時(shí)后的AFC的變化情況。 五觀察SAP肺臟內(nèi)Na—K—ATP酶和ENaC的變化 用定量real-Time PCR的方法測定在SAP4h組中肺臟的不同亞型的Na—K—ATP酶和ENaC mRNA的變化規(guī)律。

7、 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13.0版本軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。測得結(jié)果用x±s表示，采用區(qū)組方差分析、t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 向大鼠的胰膽管內(nèi)逆行注入?；悄懰峥梢哉T發(fā)急性重癥胰腺炎，癥狀明顯，腹腔內(nèi)產(chǎn)生大量血性腹水，皂化斑大量形成。血清中淀粉酶和脂肪酶明顯升高，脂肪酶升高更為明顯比對照組高30倍以上，淀粉酶比對照組升高3倍以上。病理切片中胰腺有間質(zhì)水腫和白細(xì)胞的浸潤，肺泡水腫和白細(xì)胞

8、的浸潤。時(shí)間—生存曲線中SAP大鼠的生存率隨時(shí)間明顯下降，本組72小時(shí)內(nèi)全部死亡。SAP動物模擬成功。 二在SAP大鼠的動物模型中，AFC測量值明顯高于對照組和假手術(shù)組的。4小時(shí)AFC升值最高，是對照組的180％(p<0.001)。之后逐漸下降。24小時(shí)為對照組的120％(p<0.05)。48小時(shí)接近對照組水平。對照組和假手術(shù)組兩組AFC值無明顯差別(p>0.05)。 三在SAP—4h大鼠組中，升高的AFC值被不同亞型的

9、腎上腺素受體阻滯劑不同的程度的抑制。其中表現(xiàn)最為明顯的為α1+α2腎上腺受體抑制劑，幾乎完全抑制了AFC的升高。β腎上腺受體抑制劑僅輕度抑制AFC。 四切除雙側(cè)腎上腺的大鼠即使發(fā)生SAP4小時(shí)后，AFC測定值對比SAP4h組僅輕度升高。 五在SAP大鼠的肺臟4小時(shí)組中，發(fā)現(xiàn)α，γ—ENaC mRNA升高明顯，分別升高了3倍和2倍，而Na—K—ATP酶的僅α亞體升高3倍以上，β亞體幾乎不升高。 結(jié)論： 在急

10、性重癥胰腺炎的大鼠模型中，肺臟出現(xiàn)了一過性的肺泡液體清除能力的升高。這種升高在早期達(dá)到高峰(4小時(shí)內(nèi))，之后隨著時(shí)間而逐漸減弱，導(dǎo)48小時(shí)后逐漸接近正常。這種升高的調(diào)節(jié)途徑主要是通過機(jī)體的腎上腺產(chǎn)生內(nèi)源性的腎上腺素通過血液循環(huán)激動肺泡表面的α1，α2腎上腺受體，增加肺泡細(xì)胞表面的α，γ—ENaC和底部的αNa—K—ATP酶的數(shù)目，增加Na離子的主動轉(zhuǎn)運(yùn)來實(shí)現(xiàn)的肺泡腔內(nèi)液體的轉(zhuǎn)運(yùn)。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同以往的其他的動物病理模型的研究結(jié)果