腸病及肺的病理變化及相關調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路研究.pdf

1、目的:從“腸病及肺”的病理變化及相關調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路的研究入手,探討中醫(yī)“肺與大腸相表里”關系的科學性,尋找其實驗依據(jù)。
　　方法:采用復方地芬諾酯片灌胃方法建立大鼠便秘模型,從大鼠的糞便性狀、胃腸功能、腸道菌群微生態(tài)學、血常規(guī)檢測、ELISA法檢測血清TNF-α、IL-1、PGD2、sIgA等炎性介質(zhì)、結腸局部病理組織切片和透射電鏡下大鼠結腸組織的超微結構等方面,對該模型進行評價。并從病理生理學方面、微生態(tài)學、病理組織形

2、態(tài)和細胞超微結構等方面觀察“腸病”大鼠的結腸和肺、心、肝、脾、腎等組織的變化。在大鼠便秘模型“腸病及肺”的情況下,對SP、VIP、CCK8、CGRP等相關調(diào)控物質(zhì)的表達的變化和ERK信號通路進行研究。
　　結果:模型建立與評價:便秘模型組大鼠大便次數(shù)減少,排便困難,糞便外觀變小,質(zhì)地干硬,粒數(shù)減少、干濕重量均減輕(P<0.05),其胃內(nèi)殘留率升高(P<0.05),大腸炭末推進率明顯低于對照組(P<0.05);腸道菌群檢測發(fā)現(xiàn),模型

3、組大鼠的腸道需氧菌、真菌及大腸桿菌數(shù)量顯著增多(P<0.01),而厭氧菌、類桿菌、雙岐桿菌則減少(P<0.01);血常規(guī)檢測,模型組白細胞計數(shù)升高(P>0.05),但無統(tǒng)計學意義,中性粒細胞數(shù)顯著升高(P<0.05),淋巴細胞數(shù)無變化;ELISA檢測,便秘模型組TNF-α、IL-1、PGD2顯著升高(P<0.05),sIgA則降低(P<0.05);光鏡下,模型組大鼠結腸表現(xiàn)為局部充血、水腫、黏膜輕度糜爛,結腸黏膜上皮欠完整,腺體排列欠規(guī)

4、則,黏膜及黏膜下大量炎細胞浸潤;電鏡觀察,模型組可見細胞核固縮,線粒體腫脹,嵴排列紊亂,少數(shù)斷裂或消失,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,有脫顆?，F(xiàn)象,核糖體減少,微絨毛稀疏、雜亂。
　　“腸病及肺”過程中肺組織的病理變化和微生態(tài)學觀察:模型組大鼠的呼吸頻率較正常對照組顯著增快(P<0.05),每分鐘通氣量和潮氣量均顯著降低(P<0.05);模型組肺部需氧菌增多,厭氧菌顯著減少,真菌顯著增多(P<0.01);模型組肺泡結構紊亂模糊,肺泡壁增厚明顯,

5、肺泡腔狹窄,肺泡腔內(nèi)可見少量脫落的肺泡上皮細胞及中性粒細胞,肺泡間隔增寬,部分間質(zhì)小血管周圍有淋巴細胞浸潤,部分肺泡壁毛細血管輕度擴張充盈;而造模前后心、肝、脾、腎組織光鏡觀察,均未發(fā)現(xiàn)病理變化;電鏡觀察發(fā)現(xiàn),模型組可見肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細胞腫脹,細胞核腫脹,胞漿內(nèi)局限性透亮區(qū),線粒體腫脹,排列紊亂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張,部分細胞器結構不清。
　　相關調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路檢測:模型組結腸SP的表達比正常對照組顯著降低(P<0.05

6、),肺組織中 SP的表達比正常對照組顯著升高(P<0.05)。模型組大鼠的結腸VIP的表達量比對照組顯著升高(P<0.05),肺組織中VIP的表達顯著降低(P<0.01)。模型組大鼠的結腸CCK8的表達量比正常對照組顯著升高(P<0.01),肺組織中CCK8的表達比對照組顯著降低(P<0.01)。模型組大鼠的結腸CGRP的表達量比正常對照組顯著升高(P<0.05),肺組織中CGRP的表達也顯著升高(P<0.05)。而兩組的肝、心、脾、腎

7、等組織中SP、VIP、CCK8、CGRP的表達比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。RT-PCR檢測,模型組大鼠的結腸組織中iNOS mRNA表達量較正常對照組顯著升高(P<0.01),同時,其肺組織iNOS mRNA表達量也顯著升高(P<0.01)。模型組大鼠的結腸組織中ERK表達量較對照組顯著升高(P<0.01),同時,其肺組織ERK表達量也顯著升高(P<0.01)。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),模型組大鼠的結腸和肺組織中ERK表