腸病及肺的病理變化及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號(hào)通路研究.pdf

1、目的:從“腸病及肺”的病理變化及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號(hào)通路的研究入手,探討中醫(yī)“肺與大腸相表里”關(guān)系的科學(xué)性,尋找其實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用復(fù)方地芬諾酯片灌胃方法建立大鼠便秘模型,從大鼠的糞便性狀、胃腸功能、腸道菌群微生態(tài)學(xué)、血常規(guī)檢測(cè)、ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-1、PGD2、sIgA等炎性介質(zhì)、結(jié)腸局部病理組織切片和透射電鏡下大鼠結(jié)腸組織的超微結(jié)構(gòu)等方面,對(duì)該模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。并從病理生理學(xué)方面、微生態(tài)學(xué)、病理組織形

2、態(tài)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等方面觀察“腸病”大鼠的結(jié)腸和肺、心、肝、脾、腎等組織的變化。在大鼠便秘模型“腸病及肺”的情況下,對(duì)SP、VIP、CCK8、CGRP等相關(guān)調(diào)控物質(zhì)的表達(dá)的變化和ERK信號(hào)通路進(jìn)行研究。
　　結(jié)果:模型建立與評(píng)價(jià):便秘模型組大鼠大便次數(shù)減少,排便困難,糞便外觀變小,質(zhì)地干硬,粒數(shù)減少、干濕重量均減輕(P<0.05),其胃內(nèi)殘留率升高(P<0.05),大腸炭末推進(jìn)率明顯低于對(duì)照組(P<0.05);腸道菌群檢測(cè)發(fā)現(xiàn),模型

3、組大鼠的腸道需氧菌、真菌及大腸桿菌數(shù)量顯著增多(P<0.01),而厭氧菌、類桿菌、雙岐桿菌則減少(P<0.01);血常規(guī)檢測(cè),模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高(P>0.05),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高(P<0.05),淋巴細(xì)胞數(shù)無(wú)變化;ELISA檢測(cè),便秘模型組TNF-α、IL-1、PGD2顯著升高(P<0.05),sIgA則降低(P<0.05);光鏡下,模型組大鼠結(jié)腸表現(xiàn)為局部充血、水腫、黏膜輕度糜爛,結(jié)腸黏膜上皮欠完整,腺體排列欠規(guī)

4、則,黏膜及黏膜下大量炎細(xì)胞浸潤(rùn);電鏡觀察,模型組可見(jiàn)細(xì)胞核固縮,線粒體腫脹,嵴排列紊亂,少數(shù)斷裂或消失,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,有脫顆?，F(xiàn)象,核糖體減少,微絨毛稀疏、雜亂。
　　“腸病及肺”過(guò)程中肺組織的病理變化和微生態(tài)學(xué)觀察:模型組大鼠的呼吸頻率較正常對(duì)照組顯著增快(P<0.05),每分鐘通氣量和潮氣量均顯著降低(P<0.05);模型組肺部需氧菌增多,厭氧菌顯著減少,真菌顯著增多(P<0.01);模型組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂模糊,肺泡壁增厚明顯,

5、肺泡腔狹窄,肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)少量脫落的肺泡上皮細(xì)胞及中性粒細(xì)胞,肺泡間隔增寬,部分間質(zhì)小血管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),部分肺泡壁毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張充盈;而造模前后心、肝、脾、腎組織光鏡觀察,均未發(fā)現(xiàn)病理變化;電鏡觀察發(fā)現(xiàn),模型組可見(jiàn)肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹,細(xì)胞核腫脹,胞漿內(nèi)局限性透亮區(qū),線粒體腫脹,排列紊亂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張,部分細(xì)胞器結(jié)構(gòu)不清。
　　相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號(hào)通路檢測(cè):模型組結(jié)腸SP的表達(dá)比正常對(duì)照組顯著降低(P<0.05

6、),肺組織中 SP的表達(dá)比正常對(duì)照組顯著升高(P<0.05)。模型組大鼠的結(jié)腸VIP的表達(dá)量比對(duì)照組顯著升高(P<0.05),肺組織中VIP的表達(dá)顯著降低(P<0.01)。模型組大鼠的結(jié)腸CCK8的表達(dá)量比正常對(duì)照組顯著升高(P<0.01),肺組織中CCK8的表達(dá)比對(duì)照組顯著降低(P<0.01)。模型組大鼠的結(jié)腸CGRP的表達(dá)量比正常對(duì)照組顯著升高(P<0.05),肺組織中CGRP的表達(dá)也顯著升高(P<0.05)。而兩組的肝、心、脾、腎

7、等組織中SP、VIP、CCK8、CGRP的表達(dá)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。RT-PCR檢測(cè),模型組大鼠的結(jié)腸組織中iNOS mRNA表達(dá)量較正常對(duì)照組顯著升高(P<0.01),同時(shí),其肺組織iNOS mRNA表達(dá)量也顯著升高(P<0.01)。模型組大鼠的結(jié)腸組織中ERK表達(dá)量較對(duì)照組顯著升高(P<0.01),同時(shí),其肺組織ERK表達(dá)量也顯著升高(P<0.01)。Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),模型組大鼠的結(jié)腸和肺組織中ERK表