糖槭苷類成分提取分離及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的:本課題以槭樹科Acerraceae槭屬Smilax.L植物糖槭Acer Saccharum為原材料，對其進(jìn)行提取分離及抗腫瘤活性篩選，從而尋找出抗腫瘤作用最好的組分及單體化合物。并對單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定及抗腫瘤活性機(jī)制的研究。
　　方法:（1）總苷的提取：將糖槭葉在75％乙醇中浸泡12 h，采用超聲波提取，經(jīng)D101大孔吸附樹脂洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥即得。（2）總苷的分離：通過硅膠色譜柱、制備薄層色譜分

2、離和反復(fù)重結(jié)晶等方法得到單體化合物。（3）化合物的結(jié)構(gòu)鑒定：通過分析化合物的理化性質(zhì)、13C-NMR、1H-NMR及MS分析鑒定；（4）抗腫瘤有效部位的篩選：采用MTT法，以人肝癌SMMC7721和胃癌細(xì)胞SGC7901為靶細(xì)胞，對總苷洗脫出的10個組分進(jìn)行抗腫瘤活性實(shí)驗。（4）單體化合物抗腫瘤活性測試：對有效組分分離出的各化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，采用MTT方法，測試化合物對SGC7901腫瘤細(xì)胞和SMM7721腫瘤細(xì)胞的抑制作用，確

3、定有效的抗腫瘤活性單體化合物。（6）化合物抗腫瘤作用機(jī)制研究：MTT法檢測化合物抑制細(xì)胞增殖作用；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況；體內(nèi)抗腫瘤作用觀察化合物對小鼠瘤重和免疫器官的影響；流式細(xì)胞儀檢測化合物對SGC7901細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果:（1）糖槭總苷分離出7個化合物，其中3種化合物對人肝癌SMMC7721和人胃癌SGC7901有抑制細(xì)胞增殖作用，TQ-B3濃度為12.5~100μg·mL-1、TQ-G1濃度為25.0~100

4、μg·mL-1、TQ-I1濃度為50.0~100μg·mL-1時與陰性對照組相比有顯著差異（P<0.05）。倒置顯微鏡觀察TQ-B3作用的細(xì)胞之間不能連接，細(xì)胞胞體縮小、變褶皺、有細(xì)胞凋亡小體；體內(nèi)抑瘤實(shí)驗表明，TQ-B3的中、高劑量分別可減少SMMC7721荷瘤小鼠瘤重至1.237±0.480 g、0.958±0.593 g，與生理鹽水組比較有顯著差異（P<0.05），TQ-B3的中、高劑量分別可增加SMMC7721荷瘤小鼠脾重至0.

5、163±0.043 g，0.180±0.064 g，TQ-B3的中、高劑量分別可增加SMMC7721荷瘤小鼠胸腺重量至0.199±0.078 g，0.214±0.511 g，與生理鹽水組比較有顯著差異（P<0.05）。TQ-B3的中、高劑量分別可減少SGC7901荷瘤小鼠瘤重至1.307±0.631 g、0.958±0.122 g，與生理鹽水組比較有顯著差異（P<0.05），TQ-B3的中、高劑量分別可增加SGC7901荷瘤小鼠脾重至0

6、.161±0.028、0.182±0.064 g，TQ-B3的中、高劑量分別可增加SGC7901荷瘤小鼠胸腺重至0.209±0.037 g、0.214±0.511 g，與生理鹽水組比較有顯著差異（P<0.05）。TQ-B3影響細(xì)胞周期實(shí)驗結(jié)果，2μg·mL-1時G0/G1為49.56±1.4，G2/M為8.32±0.69，S期為42.12±1.36；4μg·mL-1時G0/G1為49.67±1.72，G2/M為5.55±0.64，S期為

7、44.78±0.94；8μg·mL-1時 G0/G1為71.67±1.53，G2/M為0，S期為28.33±0.83。
　　結(jié)論：通過實(shí)驗篩選出具有抗腫瘤作用的單體化合物TQ-B3，TQ-G1及TQ-I1。其中TQ-B3作用最強(qiáng)，其抗腫瘤作用機(jī)制為：TQ-B3對人肝癌SMMC7721和胃癌細(xì)胞 SGC7901有明顯的抑制增殖作用，抑制細(xì)胞增殖作用呈量效關(guān)系；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；可有效抑制小鼠瘤重并可提高荷瘤小鼠免疫功能；增強(qiáng)免疫能力