版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景和目的:
脂肪干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是從脂肪組織中分離提取的一種具有多向分化潛能的干細胞,對缺血性疾病的治療有積極作用,但相關機制的研究有待進一步深入。本實驗目的在于探索局部移植人來源脂肪干細胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)對小鼠隨意型皮瓣成活能力及血管新生效應的影響,分離培養(yǎng)人脂肪干細胞,用于小鼠隨意型皮瓣模型,觀察皮
2、瓣組織微血管數(shù)量、皮瓣成活率及細胞因子水平的變化,從脂肪干細胞旁分泌作用刺激血管新生的角度,探索脂肪干細胞輔助皮瓣移植的作用機制。
方法:
1、hADSCs的分離、培養(yǎng)、鑒定及標記:利用鄭州大學第五附屬醫(yī)院健康成人吸脂術后的脂肪混懸液,采用Ⅰ型膠原酶消化法,體外分離、提取hADSCs,經(jīng)體外培養(yǎng)及傳代,于顯微鏡下進行細胞形態(tài)學的觀察,取第3代細胞運用流式細胞儀對細胞表面抗原標記物進行檢測。另取第3代細胞進行成脂、成骨
3、分化誘導培養(yǎng),至第21d固定細胞并分別用油紅O或茜素紅對誘導的細胞進行染色,倒置相差顯微鏡下觀察誘導結果。應用CM-Dil熒光標記第3代hADSCs,顯微鏡下觀察染色情況。
2、實驗動物與分組:清潔級(SPF)雌性4周齡小鼠30只,體重25-30g,按照隨機數(shù)字表法分為2組:實驗組(ADSCs組,n=15)于背部制備隨意型皮瓣并將500μl密度為1×106個/ml的細胞懸液分三次注射于皮瓣的蒂部、中部、遠端;對照組(PBS組,
4、n=15)于背部制備隨意型皮瓣并將等量PBS同法注射于皮瓣的蒂部、中部、遠端。
3、小鼠背部隨意型皮瓣模型的建立、細胞移植、標本采集及檢測指標:于小鼠背部沿身體長軸方向設計蒂在顱側的隨意型皮瓣3cm×1.5cm,采用局部注射移植ADSCs;移植后7d,計算各組皮瓣成活率;移植后14d,取皮瓣組織,隨機作冰凍切片CD31免疫熒光染色,熒光顯微鏡下觀察皮瓣組織微血管分布情況,并對CM-Dil標記的ADSCs示蹤;ELISA法檢測皮
5、瓣組織中VEGF水平;Westernblot法檢測皮瓣組織中SDF-1水平。
4、統(tǒng)計學方法:所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示,采用SPSSStatistics17.0軟件進行統(tǒng)計分析,組間比較采用t檢驗;以P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。
結果:
1、體外ADSCs分離、培養(yǎng)、鑒定和標記:提取的ADSCs貼壁生長,呈梭形成纖維細胞樣,單層分布,均勻有序。流式細胞學檢查示第3代ADSCs表面抗原表達比例分別為CD
6、105(93.30±1.24)%、CD90(97.25±2.33)%、CD31(0.20±0.04)%、CD34(3.82±0.86)%、CD45(3.12±0.53)%、HLA-DR(0.81±0.09)%,同型對照均為陰性。成脂誘導21d后的ADSCs經(jīng)油紅O染色,細胞內(nèi)可見成片分布的亮紅色圓泡,提示胞漿內(nèi)有脂滴形成。成骨誘導21d后的ADSCs經(jīng)茜素紅染色,可見島狀分布的橙紅色顆粒,提示有沉積的鈣結節(jié)。CM-DiI標記后即刻觀察,
7、在熒光顯微鏡下見標記后的ADSCs均顯紅色熒光,經(jīng)消化、重懸后細胞呈球形,胞漿豐富,活性良好,CM-Dil標記陽性率大于90%。
2、皮瓣成活率比較情況:術后7d,成活皮瓣與壞死皮瓣間分界清晰,易被雙盲觀察者區(qū)別。實驗組皮瓣成活面積為(3.78±0.16)cm2,成活率為(84±3.625)%;對照組皮瓣成活面積為(2.27±0.16)cm2,成活率為(72.2±3.406)%;兩組皮瓣成活率比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.0
8、5)。
3、皮瓣組織中微血管密度的檢測和CM-Dil熒光示蹤:和對照組相比,實驗組成活皮瓣內(nèi)微血管的密度有明顯的增加,實驗組為每單位面積內(nèi)(32.2±2.59)個,對照組為每單位面積內(nèi)(12.8±3.11)個,兩組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。鏡下可見少量紅色熒光細胞分布于皮膚組織和皮下組織深層內(nèi),未觀察到典型的紅色熒光與綠色熒光重疊現(xiàn)象。
4、皮瓣組織中細胞因子水平的檢測:ELISA檢測顯示實驗組和對照組
9、的皮瓣組織中均含有VEGF,與對照組相比,實驗組VEGF分泌量顯著增多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Westernblot結果顯示,實驗組和對照組SDF-1表達均呈陽性,實驗組SDF-1蛋白表達水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結論:
1、ADSCs可以通過Ⅰ型膠原酶消化法分離提取,該方法簡單、快捷,所提取到的細胞增殖能力強,具有多向分化潛能,基本符合ADSCs的特性。運用CM-Dil可以
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 脂肪來源干細胞促進任意型皮瓣成活的實驗研究.pdf
- 脂肪基質血管成分促進隨意皮瓣血管化的實驗研究.pdf
- 兔自體脂肪來源干細胞改善擴張皮瓣淤血作用的觀察.pdf
- 脂肪干細胞對皮瓣血運作用的研究.pdf
- 苯妥英鈉對隨意皮瓣成活影響的實驗研究.pdf
- 地塞米松經(jīng)皮給藥對隨意皮瓣成活的影響.pdf
- 局部注射VEGF對隨意型擴張皮瓣存活影響的實驗研究.pdf
- 銀杏提取液對隨意型皮瓣成活影響的實驗研究.pdf
- 脂肪干細胞經(jīng)上調(diào)HIF-1α改善糖尿病缺血皮瓣新生血管形成的實驗研究.pdf
- 兔脂肪來源干細胞改善靜脈淤血皮瓣模型微循環(huán)功能的實驗研究.pdf
- 富血小板血漿對人原代脂肪來源干細胞增殖的影響.pdf
- 天然水蛭素對豬隨意型皮瓣靜脈淤血影響的實驗研究.pdf
- EGF對大鼠背部隨意皮瓣存活影響的實驗研究.pdf
- 肝細胞生長因子基因轉染人脂肪干細胞對脂肪移植血管化的影響.pdf
- 人脂肪來源干細胞上清液對裸鼠皮膚創(chuàng)面愈合的影響.pdf
- 氨氯地平經(jīng)皮給藥對缺血隨意皮瓣成活的影響.pdf
- 局部外用仁紅酒對大鼠背部隨意皮瓣成活的影響.pdf
- 大蒜素對大鼠隨意皮瓣成活影響的實驗研究.pdf
- 還原型谷胱甘肽對大鼠隨意皮瓣成活影響的實驗研究.pdf
- 烏司他丁對大鼠隨意皮瓣存活影響的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論