術(shù)前局部注射VEGF對(duì)大鼠隨意皮瓣成活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究術(shù)前局部注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascolar Endothelial Growth Factor,VEGF)對(duì)大鼠背部隨意皮瓣成活的影響,探討其作用機(jī)理,為臨床實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:選用20只4月齡Wistar大鼠,均為雄性,體重270g±30g,隨機(jī)分為A、B兩組,每組10只。A組(實(shí)驗(yàn)組):術(shù)前7天注射VEGF,B組(對(duì)照組):術(shù)前7天注射磷酸緩沖鹽(PBS)溶液。將大鼠用2％的戊巴比妥鈉(0.2

2、ml/100g)腹腔注射麻醉,背部脫毛后,在背部設(shè)計(jì)2cm×8cm的隨意皮瓣,蒂部位于雙側(cè)髂棘連線,皮瓣遠(yuǎn)端位于頭側(cè)。在設(shè)計(jì)皮瓣上用1cm方格劃線標(biāo)示,并用墨汁紋刺固定。A組術(shù)前7天于擬形成的皮瓣內(nèi)一次性皮下注射280ng VEGF,B組術(shù)前7天于擬形成的皮瓣內(nèi)一次性皮下注射相同體積的磷酸緩沖鹽(PBS)溶液。7天后所有大鼠在麻醉下形成隨意型皮瓣,并于皮瓣中線上中點(diǎn)處取0.5cm×0.5cm全層組織留做標(biāo)本,皮瓣原位縫合。所有動(dòng)物在皮瓣

3、形成后觀察皮瓣成活情況,并于術(shù)后第7天處死大鼠,測(cè)量皮瓣成活面積,計(jì)算成活率。將術(shù)中留取的組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色,進(jìn)行組織病理學(xué)觀察,并進(jìn)行PCNA、CD34免疫組化檢測(cè),對(duì)CD34陽性血管作(血管密度)計(jì)數(shù),計(jì)算局部組織微血管密度(MVD)。
　　 結(jié)果:1.外科觀察:實(shí)驗(yàn)組皮瓣遠(yuǎn)端壞死范圍較小,近端存活皮瓣外觀紅潤(rùn),質(zhì)地柔軟,皮瓣周邊傷口炎癥反應(yīng)輕微,組織水腫不明顯。對(duì)照組皮瓣遠(yuǎn)端壞死范圍較大,近端存活區(qū)皮

4、瓣外觀稍欠紅潤(rùn),質(zhì)地稍硬,周邊傷口炎癥反應(yīng)稍重,皮瓣水腫較明顯。2.皮瓣存活率檢測(cè):皮瓣存活率為皮瓣存活區(qū)與皮瓣總面積之比。實(shí)驗(yàn)組皮瓣存活率為67.12％,對(duì)照組皮瓣存活率為40.69％,兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3.組織學(xué)檢查:標(biāo)本HE染色,實(shí)驗(yàn)組皮瓣組織表皮變薄,皮下有大面積肉芽組織增生,皮膚附屬器豐富,血管內(nèi)皮細(xì)胞顯示增生。對(duì)照組表皮正常,角化正常,皮下肉芽組織增生不明顯,皮膚附屬器相對(duì)較少,血管內(nèi)皮細(xì)胞增生不明

5、顯。4.增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的檢測(cè):用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠皮瓣中PCNA蛋白的表達(dá)。PCNA主要在皮膚的棘層及基底細(xì)胞層和真皮層毛囊、皮質(zhì)腺表達(dá)。表現(xiàn)為細(xì)胞核著色,陽性染色呈棕黃色顆粒物。隨機(jī)選取5個(gè)視野(100×),利用FR-988生物顯微圖象分析系統(tǒng)對(duì)PCNA蛋白表達(dá)進(jìn)行分析,用平均灰度值來表示,平均灰度值大(染色強(qiáng)度弱、透光度強(qiáng))蛋白表達(dá)少,反之則表達(dá)多。實(shí)驗(yàn)組(A)平均灰度為64.37±0.91,對(duì)照組(B)平均灰度為

6、68.71±2.07,實(shí)驗(yàn)組(A)較對(duì)照組(B)PCNA表達(dá)增強(qiáng),結(jié)果分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。5.皮瓣內(nèi)微血管密度(MVD)檢測(cè):采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠皮瓣中CD34蛋白的表達(dá),利用FR-988生物顯微圖象分析系統(tǒng)對(duì)CD34蛋白表達(dá)進(jìn)行分析,CD34主要在毛細(xì)血管、小動(dòng)脈和小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá),陽性染色呈棕黃色顆粒物。在高倍鏡下取5個(gè)視野,用顯微鏡測(cè)微尺進(jìn)行計(jì)數(shù),以細(xì)胞個(gè)數(shù)/mm2為單位。實(shí)驗(yàn)組(A)平均微血管密度為21.