不同劑量重組人生長激素皮下注射對大鼠背部隨意皮瓣存活影響的實驗研究.pdf

1、研究背景：隨著對創(chuàng)面修復(fù)的不斷深入研究，越來越多的目光轉(zhuǎn)向皮瓣修復(fù)。這種修復(fù)方法不僅能完成對創(chuàng)面的完全覆蓋，還能解決創(chuàng)基薄弱、骨及肌腱外露等傳統(tǒng)手術(shù)修復(fù)困難的難治性創(chuàng)面，因此，各大外科對皮瓣修復(fù)的應(yīng)用也日益頻繁。而隨意皮瓣作為其中最常用方法之一，其成活率的提高一直廣受醫(yī)生、學者關(guān)注和研究。隨意皮瓣內(nèi)缺少知名血管及缺血-再灌注損傷（I-R損傷）仍極大的限制著隨意皮瓣的成活。近年來，隨著皮瓣設(shè)計的不斷完善，比如：最佳長寬比例、皮瓣形狀、術(shù)中

2、不同血管吻合方式、延遲行皮瓣移植、加強創(chuàng)面護理、術(shù)后定期高壓氧治療以及更換敷料時各種生長因子的應(yīng)用等方法的大量推行，皮瓣成活率顯著上升，但臨床應(yīng)用中皮瓣壞死的情況仍屢見不鮮。如何能最大程度避免皮瓣中I-R損傷的發(fā)生，提高其皮瓣生存率成為近年來的熱門研究方向。重組人生長激素（rhGH）在以往研究中已被證實了有增強血漿蛋白mRNA表達和促進血清白蛋白（ALB）合成、提高血糖、分解脂質(zhì)、免疫調(diào)控、增生血管、減少蛋白分解,減少氮丟失,促進傷口愈

3、合的作用。在此基礎(chǔ)之上，rhGH的臨床應(yīng)用不斷增加，并擴展到燒傷創(chuàng)面及皮瓣存活方面。
　　皮瓣移植后補充rhGH可以明顯降低炎癥因子白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）的表達，減少中性粒細胞的聚集。并刺激單核細胞的遷移、促進超氧陰離子生成，使機體的抵抗力得以提高，從而減輕炎癥反應(yīng)。彭麗霞等研究表明，大鼠皮下注射rhGH后可促進皮瓣中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，從而起到促進血

4、管新生的作用，使皮瓣壞死率降低。但其中劑量的選擇尚未進行明確實驗證明?；谏鲜鲈颍敬螌嶒炓源笫鬄槟Ｐ停炞C不同劑量rhGH對大鼠背部隨意皮瓣的影響，以了解其皮下注射的有效劑量。
　　目的：通過皮下注射rhGH影響大鼠背部隨意皮瓣成活，并采用不同注射劑量，觀察不同劑量的rhGH對大鼠背部隨意皮瓣影響程度，找出最佳注射劑量，為其臨床應(yīng)用前景做出初步評估。
　　方法：健康成年SD大鼠64只，均在其背部正中設(shè)計蒂在尾端的大小為2

5、cm*4cm的隨意皮瓣，并采用隨機分配原則，將大鼠分為A（生理鹽水組）、B（0.05IU/Kg rhGH組）、C（0.1 IU/Kg rhGH組）、D（0.2 IU/Kg rhGH組）四組。術(shù)后即刻開始皮下注射藥物，連續(xù)7天，一日一次。四組均于術(shù)后第7天拍照計算皮瓣成活率，并取所有皮瓣遠端進行實驗結(jié)果觀察。將標本進行HE染色、免疫組化染色觀察VEGF及CD34在組織中的表達情況，計算皮瓣微血管密度（MVD），數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，明確實驗

6、目的。
　　結(jié)果：1、皮瓣大體觀察：A組皮瓣近端皮瓣成活區(qū)呈粉紅色，毛發(fā)稀疏。中段及遠端部分壞死，呈黑色，質(zhì)硬，彈性明顯降低，無毛發(fā)生長，針刺不出血，皮瓣下淡紅色分泌物較多。B組皮瓣近端色澤紅潤，成活尚可，中段開始逐漸色澤晦暗，呈棕色，少量黑色痂殼附著，彈性降低，針刺可見少量出血，毛發(fā)逐漸稀疏，皮瓣下存在少量分泌物，直至遠端色棕黑。C組及D組皮瓣成活情況相似，大部分皮瓣存活良好，近端及中段呈淡紅色，彈性與正常組織相似，無明顯紅腫等

7、情況。遠端及少許邊緣部位，可見部分棕黑色壞死區(qū)，面積遠小于A、B組，針刺出血，皮瓣下無明顯積血積液。
　　2、皮瓣成活率：經(jīng)實驗及統(tǒng)計學分析可以得出：A組（對照組）為(57.72±2.03)％，B組為(72.75±0.97)％，C組為(81.37±1.49)％，D組為(82.31±1.59)％。將全部數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（one-way ANOVA）得出：P＜0.05，各組數(shù)據(jù)總體均數(shù)不全相等。再運用LSD法將各組數(shù)據(jù)進行兩兩比

8、較可得：各實驗組與對照組進行比較，P＜O．05，差異有統(tǒng)計學意義，即rhGH皮下注射可提高皮瓣成活率。B組與C、D兩組比較結(jié)果可見：P＜O．05，差異有統(tǒng)計學意義，可得出低劑量組rhGH對皮瓣成活率的促進作用低于中、高劑量組；C、D組兩組統(tǒng)計學比較得出P＞O．05，差異無統(tǒng)計學意義，故中、高劑量rhGH促進皮瓣成活無顯著性差異。
　　3、HE染色可見：A組鏡下見組織結(jié)構(gòu)混亂不清，各層結(jié)構(gòu)顯示不明，組織明顯水腫，大量中性粒細胞及單核

9、細胞浸潤，呈急性炎癥反應(yīng)改變，少量薄壁血管生長，無明顯管狀血管，部分纖維組織生長。B組真皮下組織較混亂，組織水腫及中性粒細胞及單核細胞浸潤較A組減輕，大量毛細血管生長，肉芽清晰可見。C組及D組鏡下少許炎癥細胞浸潤，組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，新生管狀血管生成，內(nèi)可見紅細胞充盈。
　　4、CD34及VEGF在組織中的表達：運用免疫組化染色觀察組織內(nèi)CD34及VEGF的表達強弱，結(jié)果明確可見CD34染色玻片中CD34呈棕黃色顆粒，主要分布于細胞

10、漿毛細血管周圍，在B、C、D組中的表達明顯高于A組，D組最高，C組其次。而VEGF免疫組化檢測中呈藥物干預(yù)組可見大量棕黃色顆粒分布成團狀，對照組則呈點狀散在分布，分布密度D組≥C組＞B組＞A組。
　　5、微血管密度檢測（MVD）：將CD34免疫組化染色玻片置于100倍光鏡視野下，每張玻片選取6個視野計數(shù)微血管數(shù)目并取其均值。A組：（5.00±1.46）條/mm2，B組（10.55±1.78）條/mm2,C組（14.40±1.63）

11、條/mm2，D組（15.19±1.46）條/mm2，進行單因素方差分析后得出，P＜0.05，各組總體均數(shù)不完全相等，即表示各組間差異有統(tǒng)計學意義。再LSD法兩兩比較得出，藥物干預(yù)組與對照組P＜0.05，有顯著差異，C、D組與B組比較得出P＜0.05，低劑量組微血管密度偏低。C、D兩組比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：1）重組人生長激素皮下注射可促進大鼠背部隨意皮瓣內(nèi)CD34及VEGF的表達增加，從而促進皮瓣內(nèi)新生血管