吡格列酮藥物延遲對大鼠跨區(qū)穿支皮瓣成活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR-γ）激動劑吡格列酮(Pioglitazone，Piog)藥物延遲對大鼠背部跨區(qū)穿支皮瓣成活及choke血管的影響，并探討其作用機(jī)制，為指導(dǎo)臨床上穿支皮瓣的擴(kuò)大切取提供新的思路和方法。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組及動物模型制作:
　　80只雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，各40只，在大鼠背部右側(cè)建立保留一側(cè)旋髂深動脈穿支為蒂的三血管體穿支皮瓣

2、，包括兩個(gè)choke區(qū)域。實(shí)驗(yàn)組術(shù)前吡格列酮10mg·kg-1·d-1溶于1.5ml生理鹽水連續(xù)5天灌胃，最后一次術(shù)前2小時(shí)灌胃，對照組同體積生理鹽水按上述方法灌胃。
　　2.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計(jì):
　　術(shù)后1-7天，肉眼觀察皮瓣成活狀況，包括皮瓣顏色、組織彈性、質(zhì)地，壞死面積等，并記錄。術(shù)后第7天麻醉下拍攝高質(zhì)量圖片，導(dǎo)入M2 Image AnalysisSystem軟件計(jì)算皮瓣成活面積百分比。
　　3.皮瓣明

3、膠-氧化鉛造影:
　　術(shù)后第7天取對照組、實(shí)驗(yàn)組各5只，采用注射器將配置好的明膠-氧化鉛混合物注入頸動脈，經(jīng)X線對皮瓣進(jìn)行血管造影。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR測PPAR-γmRNA表達(dá):
　　術(shù)后第7天處死大鼠，實(shí)驗(yàn)組、對照組各5只，取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織測PPAR-γ mRNA表達(dá)。
　　5.NO表達(dá)測定:
　　對照組和實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后即刻（術(shù)后1小時(shí)內(nèi)）、1d

4、、3d、5d、7d取chokeⅠ及Ⅱ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織。硝酸酶還原法測定組織一氧化氮(NO)含量，NO2-/NO3-含量代表NO水平。
　　6.ChokeⅡ區(qū)組織學(xué)檢測:
　　術(shù)后第7天實(shí)驗(yàn)組、對照組各5只，取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織，進(jìn)行HE染色，顯微鏡下測微血管密度(MVD)。
　　7.ChokeⅡ區(qū)免疫組化觀測VEGF表達(dá):
　　術(shù)后第7天取chokeⅡ區(qū)中央組織免疫組織化學(xué)法檢測血管內(nèi)皮

5、生長因子(VEGF)表達(dá)情況。通過對圖片陽性表達(dá)的累積吸光度A值（IA）進(jìn)行測量，作為評價(jià)血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的指標(biāo)。
　　結(jié)果:
　　1.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計(jì):
　　術(shù)后第1天，兩組皮瓣均呈現(xiàn)不同程度的腫脹，皮瓣遠(yuǎn)端呈暗紫色。術(shù)后第3天，皮瓣遠(yuǎn)端呈現(xiàn)局部灶狀、小片狀壞死。術(shù)后7d兩組皮瓣遠(yuǎn)端壞死部分均趨于融合，有不同面積痂殼出現(xiàn)，壞死區(qū)穩(wěn)定，界線清晰。兩組潛在區(qū)出現(xiàn)不同程度的壞死面積，實(shí)驗(yàn)組壞死界限位于chok

6、eⅡ區(qū)以遠(yuǎn)，對照組壞死界限接近于chokeⅡ區(qū)。根據(jù)公式:皮瓣成活率=皮瓣成活表面積/皮瓣總表面積×100％，計(jì)算各組皮瓣成活率。對照組和實(shí)驗(yàn)組背部皮瓣壞死率分別為（76.07％±2.92％）和（87.73％±3.25％），實(shí)驗(yàn)組皮瓣的成活面積顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　2.皮瓣明膠氧化鉛造影:
　　明膠-氧化鉛灌注造影顯示實(shí)驗(yàn)組血管體血管形態(tài)較清，chokeⅠ及Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)較對照組明顯增多，實(shí)

7、驗(yàn)組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)分別是(5.40±1.14)、(3.20±0.84)，均顯著高于對照組的(3.00±0.71)、(0.80±0.84)，(P＜0.01)。
　　3.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織PPAR-γ mRNA表達(dá):
　　術(shù)后第7天，實(shí)驗(yàn)組PPAR-γ mRNA表達(dá)較對照組有所提高。實(shí)驗(yàn)組chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)PPAR-γ mRNA表達(dá)量分別是對照組的1.32±0.14，1.53±0.23倍，與對照組

8、比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織NO測定:
　　除術(shù)后即刻外，其余各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)NO含量均顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組chokeⅠ區(qū)NO含量變化趨勢一致，術(shù)后即刻開始逐漸升高，至3d達(dá)峰值，之后逐漸下降，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組chokeⅡ區(qū)NO含量變化趨勢與Ⅰ區(qū)一致，除術(shù)后即刻外，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差

9、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);對照組chokeⅡ區(qū)術(shù)后即刻N(yùn)O含量即開始升高，1d時(shí)達(dá)峰值，之后逐漸下降，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.ChokeⅡ區(qū)組織學(xué)檢測:
　　在chokeⅡ區(qū)，實(shí)驗(yàn)組較對照組織輕度水腫，炎性細(xì)胞浸潤較輕，肉芽組織較少，皮膚附屬器存在，出現(xiàn)大量的新生血管。實(shí)驗(yàn)組和對照組chokeⅡ區(qū)微血管計(jì)數(shù)分別為(33.16±7.73)個(gè)/mm2和(23.29±5.91)個(gè)/mm2

10、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　6.ChokeⅡ區(qū)VEGF表達(dá):
　　通過計(jì)算累積吸光度A值(IA)，得到實(shí)驗(yàn)組和對照組chokeⅡ區(qū)陽性量分別為4368.80±458.23和2241.24±554.43，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:PPAR-γ激動劑吡格列酮可以通過提高NO含量促進(jìn)皮瓣choke血管擴(kuò)張及提高VEGF表達(dá)促進(jìn)皮瓣chokeⅡ區(qū)血管新生改善皮瓣遠(yuǎn)端血供，從而提高了大鼠背部跨