白花蛇舌草復(fù)方提取物抗癌作用的分子機(jī)理研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響來(lái)闡明白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用的分子機(jī)理。
   首先用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)測(cè)定白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞SGC7901增殖的抑制作用;然后用Western blot分析了白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)PI3K介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路中P-AKT、HIF-1α以及P-MAPK的影響;再用RT-PCR方法檢測(cè)了HIF-1α下游信號(hào)

2、分子VEGF的基因表達(dá)水平;最后通過(guò)報(bào)告基因檢測(cè)了白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)VEGF基因表達(dá)的影響。
   MTT檢測(cè)結(jié)果表明,自花蛇舌草復(fù)方提取物在低濃度時(shí)(≤0.2mg/ml)對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞有增殖作用,這可能是細(xì)胞應(yīng)激作用,而在高濃度時(shí)(≥1.0mg/ml)則對(duì)胃癌SGC7901細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,胃癌SGC7901細(xì)胞和前列腺癌DU145細(xì)胞經(jīng)過(guò)自花蛇舌革復(fù)方提取物處理

3、后,HIF~1α水平顯著降低,且表現(xiàn)出濃度和時(shí)間依賴性,而P-AKT和P-MAPK水平均沒(méi)有明顯變化。這一結(jié)果表明,白花蛇舌草復(fù)方提取物中含有信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑,但該提取物對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)通路的抑制作用可能不是通過(guò)P-AKT或者P-MAPK而是通過(guò)別的信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)影響HIF-1α的表達(dá)水平,也有可能是直接抑制HIF-1α的表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,胃癌SGC7901細(xì)胞、前列腺癌DU145細(xì)胞在經(jīng)過(guò)白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后,VEGF

4、基因表達(dá)水平顯著降低,且表現(xiàn)濃度依賴性。報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果表明,胃癌SGC7901細(xì)胞、前列腺癌DU145細(xì)胞、小鼠上皮JB6細(xì)胞在經(jīng)過(guò)白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后,VEGF基因表達(dá)水平顯著降低,且表現(xiàn)濃度依賴性。RT-PCR和報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果表明白花蛇舌草復(fù)方提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)水平有下調(diào)作用,其作用機(jī)理可能是直接影響VEGF的表達(dá)水平或通過(guò)下調(diào)HIF-1α的表達(dá)水平來(lái)間接影響VEGF的表達(dá)水平。
   綜上所述,細(xì)胞在

5、經(jīng)過(guò)白花蛇舌草復(fù)方提取物處理后,HIF-1α的表達(dá)水平和下游信號(hào)分子VEGF的基因表達(dá)水平都出現(xiàn)顯著下調(diào),但P-AKT和P-MAPK水平均沒(méi)有明顯變化。這表明,白花蛇舌草復(fù)方提取物中含有信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑,而且,該提取物對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)通路的抑制作用可能是通過(guò)別的信號(hào)傳導(dǎo)途徑或直接作用于HIF-1α基因來(lái)影響HIF-1α的表達(dá)水平并進(jìn)而影響其下游信號(hào)分子VEGF基因的表達(dá)水平。雖然具體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑還有待于進(jìn)一步的研究,但是白花蛇舌草復(fù)方提取

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