肝臟缺血再灌注損傷的機(jī)理及防治的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： (1)初步探討確定肝臟缺血/再灌注損傷程度的意義和指標(biāo)選擇。 (2)結(jié)合肝臟缺血/再灌注損傷程度，觀察缺血/再灌注損傷對(duì)大鼠肝細(xì)胞凋亡與增殖及其信號(hào)傳導(dǎo)的影響。 (3)觀察重組bcl-xL-cDNA腺病毒預(yù)處理對(duì)大鼠肝臟冷保存和缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用。 方法： (1)建立大鼠肝臟局部缺血/再灌注模型，測(cè)定缺血60、90 min/再灌注0、1、2、4、6、12、24、48h時(shí)的血清丙氨酸

2、轉(zhuǎn)氨酶(Aaminotransferase，ALT)水平和病理檢查(相對(duì)細(xì)胞死亡率)。參照本院缺血/再灌注損傷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)重新將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為4個(gè)不同的損傷程度組后分析ALT水平與病理改變的關(guān)系。 (2)建立大鼠肝臟局部缺血/再灌注模型，測(cè)定缺血60min/再灌注0、1、2、4、6、12、24h時(shí)的血清ALT水平、病理檢查、原位雜交法檢測(cè)肝細(xì)胞的相關(guān)基因(c-mycmRNA、FasmRNA、bcl-2mRNA)的相對(duì)含量、流式細(xì)胞儀檢

3、測(cè)肝細(xì)胞的Ki-67陽性率和PI陽性率。參照我院肝臟缺血/再灌注損傷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)重新將實(shí)驗(yàn)指標(biāo)分為4個(gè)不同的損傷程度組后分析各項(xiàng)指標(biāo)的變化規(guī)律。 (3)重組bcl-xL-cDNA腺病毒預(yù)處理后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)方法，對(duì)比觀察冷保存24h、48h和缺血60min/再灌注0、12h時(shí)大鼠肝細(xì)胞Ki-67陽性率和PI陽性率：對(duì)比觀察病理改變。 結(jié)果： (1)各樣本在大鼠肝臟缺血/再灌注損傷的各程度組中占的比例是：缺血60m

4、in組為輕度75％、中度14.6％、重度10.4％；缺血90min組為輕度41.7％、中度25％、重度16.7％、嚴(yán)重16.7％。損傷程度越重細(xì)胞死亡率也越高。 (2)各項(xiàng)指標(biāo)隨著大鼠肝臟缺血/再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)有明顯的改變。FasmRNA含量在再灌注4h時(shí)出現(xiàn)低谷，bcl-2mRNA含量在再灌注12h時(shí)出現(xiàn)低谷，細(xì)胞增殖率在再灌注6h時(shí)達(dá)到高峰，細(xì)胞凋亡率在再灌注12h時(shí)出現(xiàn)高峰；在中度缺血再灌注損傷組的大鼠肝細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞增

5、殖率明顯升高，其相關(guān)bcl-2 mRNA含量明顯下降；重度組的細(xì)胞死亡率明顯增高。 (3)冷保存時(shí)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的大鼠肝細(xì)胞Ki-67陽性率和PI陽性率無明顯差別：缺血/再灌注時(shí)實(shí)驗(yàn)組大鼠肝細(xì)胞PI陽性率在缺血60min/再灌注0、12h時(shí)明顯低于對(duì)照組，但Ki-67陽性率無差別，實(shí)驗(yàn)組的病理改變明顯輕于對(duì)照組。 結(jié)論： (1)肝功能血清轉(zhuǎn)氨酶水平可直接反映肝臟缺血/再灌注損傷程度，損傷程度越重，其轉(zhuǎn)氨酶水平越高