草莓花藥培養(yǎng)以及草莓鑲脈病毒檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、本研究對(duì)草莓兩個(gè)品種‘豐香’、‘雪蜜’花藥培養(yǎng)再生體系進(jìn)行了系統(tǒng)性研究，并根據(jù)GenBank序列查詢的結(jié)果，利用計(jì)算機(jī)軟件設(shè)計(jì)引物，對(duì)草莓鑲脈病毒利用PCR技術(shù)在分子水平進(jìn)行檢測(cè)，主要研究結(jié)果如下： 1． 篩選出最佳花蕾消毒時(shí)間，以70％酒精消毒5s+0.1％升汞(附加吐溫)浸泡8min消毒最好；接種前花蕾低溫(4℃)處理3d為好，愈傷組織誘導(dǎo)MS為基本培養(yǎng)基，附加BA0.5mg·L<'-1>+NAA2.0 mg·L<'-1>

2、+KT0.1mg·L<'-1>+蔗糖30g·L<'-1>培養(yǎng)基為好，分化培養(yǎng)基MS+BA1.5mg·L<'-1>+NAA0.5mg·L<'-1>+ZT2.0mg·L<'-1>+蔗糖30g·L<'-1>為宜。適宜草莓增殖培養(yǎng)基為：MS+BA0.5mg·L<'-1>+NAA0.1 mg·L<'-1>。獲得43個(gè)“雪蜜”和161個(gè)“豐香”再生株系，其再生率分別為37.5％和4.7％。 2． 通過(guò)對(duì)再生植株根尖染色體計(jì)數(shù)分析，結(jié)果顯示

3、八倍體(2n=8x=56)值株，占80％；以再生植株為材料，利用PCR技術(shù)對(duì)莓鑲脈病毒和ELISA技術(shù)對(duì)草莓環(huán)斑病毒檢測(cè)，證明花培植株不攜帶上述兩種病毒。 3． 利用改進(jìn)的CTAB法提取草莓葉片DNA，用氯仿／異戊醇(24:1)抽提時(shí)，將離心轉(zhuǎn)速提高到14000rpm，離心后減少上清液的吸取量，很好地去除了蛋白，獲得了質(zhì)量較高的草莓基因組DNA。 4． 利用PCR技術(shù)在分子水平對(duì)草莓鑲脈病毒(SVBV)進(jìn)行檢測(cè)，建立