日本血吸蟲抗體的電化學與化學發(fā)光免疫傳感器研究.pdf

1、日本血吸蟲病是一種能夠給人類造成很大危害的寄生蟲病。這種寄生蟲病在非洲、亞洲和拉丁美洲的大部分地區(qū)廣泛流行，嚴重威脅著廣大疫區(qū)人民的生命財產安全。80年代中期，血吸蟲病的防治策略由消滅媒介螺轉向以化療為主的綜合性防治，由此血吸蟲病的診斷工作顯得愈加重要。近年來發(fā)展的一些診斷方法學實驗，如對流免疫電泳（CIE）、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）、間接熒光免疫實驗（IFIA）、放射免疫測定（RIA）等已經廣泛的用于臨床檢測。這些方法大多復雜、

2、耗時，而且需要昂貴的儀器設備或者放射性化學物質。所以，開發(fā)簡單、靈敏、和低消耗的日本血吸蟲病的檢測方法依然是重要和必須的。 本論文分別研究了運用電化學和化學發(fā)光免疫分析方法來檢測日本血吸蟲抗體，并將酶催化金屬沉積技術應用到日本血吸蟲抗體的電化學免疫檢測中。主要研究工作簡述如下： 第一部分，將酶催化金屬沉積應用到日本血吸蟲抗體的電化學檢測中。將日本血吸蟲抗原通過戊二醛交聯法固定在電極上，捕獲日本血吸蟲抗體，最后接聯上堿性磷

3、酸酶（AIP）標記的二抗形成三明治夾心的模型。在完成以上步驟后，將電極浸泡在底物緩沖液中。在堿性磷酸酶的作用下，非還原性的抗壞血酸2—磷酸（AA—P）轉化成抗壞血酸（AA）。溶液中的銀離子在抗壞血酸的作用下，被還原成銀，從而使得銀顆粒沉積在電極表面，再通過電化學方法檢測。在本實驗中優(yōu)化了電極上抗原固定濃度，以及酶催化金屬沉積的時間，檢查了傳感器對人體中其他蛋白質的抗干擾能力，取得了良好的效果。掃出峰電流與日本血吸蟲抗體稀釋比的對數在1：

4、5000～1：100范圍內呈線性關系。檢測下限稀釋比為1：6457。通過對感染不同天數的兔血清以及正常兔血清的測定表明了本方法在日本血吸蟲病的臨床檢測方向有一定的應用前景。 第二部分，通過化學發(fā)光方法檢測日本血吸蟲抗體濃度。將日本血吸蟲抗原通過N—（3—二甲基氨丙基）—N—乙基碳二亞胺鹽（EDC）和N—羥基琥珀酰亞胺（NHS）固定在磁性納米粒子的表面，用其捕捉日本血吸蟲抗體，再與標記了辣根過氧化物酶（HRP）的二抗聯結形成夾心復

5、合物。分離洗滌后測量化學發(fā)光的強度，靈敏的測定樣品中的日本血吸蟲抗體含量。實驗中對免疫反應的實驗條件（如：日本血吸蟲抗原在磁性納米粒子表面的修飾濃度、修飾后磁性納米粒子的用量以及抗原與待測抗體的反應時間等）進行了優(yōu)化。此外，對人體中其他蛋白質的測定結果表明：該分析方法的抗干擾性也非常好。發(fā)光強度與感染兔血清的稀釋比在1：10000～1：100的范圍內成良好的線性關系，檢測下限為1：13442。 第三部分，將辣根過氧化物酶（HRP

6、）對H2O2的催化特性應用到血吸蟲抗體的電化學免疫檢測中。實驗通過夾心法的模式在電極表面固定了日本血吸蟲抗原（SjAg）——日本血吸蟲抗體（SjAb）——辣根過氧化物酶（HRP）標記羊抗兔IgG的生物復合膜。計時電流法檢測HRP酶催化H2O2還原對苯二酚底物產生的電流變化大小與日本血吸蟲抗體（SjAb）濃度在一定范圍內成正比。對免疫反應的實驗條件（如：電極表面固定抗原的濃度、HRP酶標二抗的濃度）進行了優(yōu)化。此外，考察了其他蛋白質對測定