新生兒輪狀病毒感染的臨床和分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:輪狀病毒(Rotavirus,RV)是導(dǎo)致世界范圍內(nèi)兒童嚴重腹瀉的最主要病原體,該病毒所致的腹瀉普遍流行,幾乎所有5歲以下的兒童均發(fā)生過RV感染。每年大約有60萬嬰幼兒死于輪狀病毒感染,占全世界5歲以下兒童總死亡人數(shù)的5％,其中80％發(fā)生在亞洲及撒哈拉以南非洲的貧窮國家;在發(fā)達國家例如美國,因胃腸炎而住院患幾中30％-70％是因為輪狀病毒感染所致,每年造成的直接或間接經(jīng)濟損失大約100億美元。在我國,輪狀病毒感染所致的急性胃腸炎占

2、30％-40％,同樣造成了醫(yī)療資源和社會經(jīng)濟的巨大損失,嚴重影響了我國嬰幼兒的健康以及生存質(zhì)量。由此可見,無論在發(fā)達國家還是發(fā)展中國家,輪狀病毒胃腸炎都是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。輪狀病毒性腸炎至今尚無特效藥物治療,且發(fā)達國家與發(fā)展中國家輪狀病毒的感染率并無明顯差異,說明改善衛(wèi)生條件及提高嬰幼兒的營養(yǎng)狀況并不能減少該病毒的傳播,因此研制有效的輪狀病毒疫苗成為預(yù)防輪狀病毒腸炎的主要手段,已經(jīng)成為當今世界衛(wèi)生組織疫苗發(fā)展計劃的首要任務(wù)之一。<

3、br>　　 當發(fā)生多種輪狀病毒混合感染時,病毒基因片段可以發(fā)生重組,從而產(chǎn)生新的病毒株,重組可以發(fā)生在輪狀病毒人株之間以及人株和動物株之間,產(chǎn)生了輪狀病毒基因多樣性,使輪狀病毒的流行株隨時間和地區(qū)不同而發(fā)生變異,給疫苗研究帶來一定的挑戰(zhàn)。特別是疫苗引入之后,可能對輪狀病毒的流行株起到選擇性作用,出現(xiàn)少見病毒株在人群中形成的爆發(fā)流行。所以我們有必要對輪狀病毒的感染情況,尤其是病毒株的分布情況進行深入的流行病學(xué)調(diào)查研究,從而及時發(fā)現(xiàn)新的流

4、行株的出現(xiàn),更好的為疫苗研究服務(wù)。
　　 新生兒輪狀病毒感染具有不同于嬰幼兒感染的特點,主要是醫(yī)院獲得性感染且可在嬰兒室中呈現(xiàn)暴發(fā)流行難以控制,同一病毒株的感染可持續(xù)數(shù)年,并且已經(jīng)有人推測感染新生兒的輪狀病毒株可能成為當?shù)厣鐓^(qū)內(nèi)隨后蔓延的新的病毒株的來源。所以在新生兒中對輪狀病毒感染株的監(jiān)測有可能早期發(fā)現(xiàn)新的流行株的出現(xiàn),及時納入疫苗研究中,以預(yù)防少見輪狀病毒株引起的感染大規(guī)模流行。
　　 之前對于腹瀉期間腸道共生菌群變

5、化的研究主要是應(yīng)用經(jīng)典的糞便細菌培養(yǎng)的方法,較早期的關(guān)于這方面的研究表明在兒童急性腹瀉期間腸道菌群由原來的以厭氧菌為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐孕柩蹙鸀橹?而對于輪狀病毒感染和腸道菌群變化的關(guān)系,國內(nèi)外研究比較少見且存在分歧。
　　 本次研究通過調(diào)查2009年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒輪狀病毒感染的主要流行株,以了解新生幾輪狀病毒的流行病學(xué)特點及與臨床的關(guān)系,為疫苗的研究提供分子流行病學(xué)基礎(chǔ),并通過檢測新生兒糞便中β-葡萄糖苷酶、β-葡糖醛

6、酸糖苷酶以及尿素酶的活性,了解其在發(fā)生輪狀病毒感染時腸道微生態(tài)的變化情況,為臨床治療提供依據(jù)。
　　 方法:收集2009年3月-12月,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒病區(qū)腹瀉病人糞便標本,經(jīng)實驗室診斷為輪狀病毒感染的新生兒糞便標本共100份,根據(jù)編碼組特異性抗原的基因VP6設(shè)計引物,進行RT-PCR擴增特異性VP6基因片段,并進行瓊脂糖凝膠電泳以確定為輪狀病毒感染,陽性者再進一步進行G、P基因分型。設(shè)計針對最常見流行株G1-G

7、4的特異性引物,進行G基因分型;P分型主要是根據(jù)流行株P(guān)[4]、P[6]、P[8]分別設(shè)計特異性引物進行RT-PCR。基因擴增結(jié)果進行瓊脂糖凝膠電泳,根據(jù)特征性分子量部位的條帶判斷基因型別。分別測定輪狀病毒腸炎組和對照組新生兒糞便中尿素酶、β-葡萄糖苷酶以及β-葡糖醛酸糖苷酶的活性,了解腸道微生態(tài)的變化情況。同時對RV感染組病例的臨床資料(包括:年齡、性別、分娩方式、喂養(yǎng)方式、腹瀉天數(shù)、每日大便最高次數(shù)、發(fā)熱和嘔吐情況)進行統(tǒng)計分析,以

8、了解新生兒輪狀病毒腸炎的臨床特征。
　　 結(jié)果:研究期間感染新生兒的輪狀病毒基因型均為G3P[8]。輪狀病毒感染組糞便尿素酶和β-葡糖醛酸糖苷酶的活性均顯著高于對照組,差異具有顯著性意義(P=0.000);輪狀病毒感染組β-葡萄糖苷酶活性與對照組相比無明顯變化(P=0.256)。浙江省新生兒輪狀病毒感染的季節(jié)性特征為院內(nèi)感染高峰發(fā)生在1-3月和10-12月;社區(qū)感染高峰是4、5月。臨床癥狀嚴重性比較:社區(qū)獲得性感染與院內(nèi)感染相比

9、、早產(chǎn)兒和足月兒相比差異無顯著性意義(P＞0.05);分娩方式和喂養(yǎng)方式相比較臨床嚴重性也無明顯差異(P均大于0.05);出生7天以內(nèi)發(fā)生感染的新生兒臨床癥狀,包括發(fā)熱、腹瀉和嘔吐的嚴重性評分值低于出生7天后發(fā)生感染的新生兒(P＜0.05)。在主要臨床癥狀中發(fā)熱和嘔吐出現(xiàn)的頻率院內(nèi)感染和社區(qū)獲得性感染沒有明顯差異(P＞0.05),而院內(nèi)感染組新生兒大便次數(shù)增加出現(xiàn)的頻率明顯高于社區(qū)獲得性感染組,大便性狀改變即出現(xiàn)水樣便或蛋花湯樣便的頻率

10、社區(qū)感染組要比院內(nèi)感染組高,P值均小于0.05,差異具有顯著性意義。
　　 結(jié)論:1、輪狀病毒是引起新生兒院內(nèi)感染的主要病原體。2009年浙江省新生兒輪狀病毒感染的流行株為G3P[8]型,未檢測出其他病毒株;
　　 2、輪狀病毒感染后有可能引起腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化。
　　 3、新生兒感染輪狀病毒后其臨床表現(xiàn)的嚴重程度與感染年齡和喂養(yǎng)方式有關(guān),與其它因素?zé)o關(guān)。
　　 4、新生兒感染輪狀病毒的方式(院內(nèi)獲得性感