新生兒輪狀病毒感染的臨床和分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:輪狀病毒(Rotavirus,RV)是導(dǎo)致世界范圍內(nèi)兒童嚴(yán)重腹瀉的最主要病原體,該病毒所致的腹瀉普遍流行,幾乎所有5歲以下的兒童均發(fā)生過(guò)RV感染。每年大約有60萬(wàn)嬰幼兒死于輪狀病毒感染,占全世界5歲以下兒童總死亡人數(shù)的5％,其中80％發(fā)生在亞洲及撒哈拉以南非洲的貧窮國(guó)家;在發(fā)達(dá)國(guó)家例如美國(guó),因胃腸炎而住院患幾中30％-70％是因?yàn)檩啝畈《靖腥舅?每年造成的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失大約100億美元。在我國(guó),輪狀病毒感染所致的急性胃腸炎占

2、30％-40％,同樣造成了醫(yī)療資源和社會(huì)經(jīng)濟(jì)的巨大損失,嚴(yán)重影響了我國(guó)嬰幼兒的健康以及生存質(zhì)量。由此可見(jiàn),無(wú)論在發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家,輪狀病毒胃腸炎都是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。輪狀病毒性腸炎至今尚無(wú)特效藥物治療,且發(fā)達(dá)國(guó)家與發(fā)展中國(guó)家輪狀病毒的感染率并無(wú)明顯差異,說(shuō)明改善衛(wèi)生條件及提高嬰幼兒的營(yíng)養(yǎng)狀況并不能減少該病毒的傳播,因此研制有效的輪狀病毒疫苗成為預(yù)防輪狀病毒腸炎的主要手段,已經(jīng)成為當(dāng)今世界衛(wèi)生組織疫苗發(fā)展計(jì)劃的首要任務(wù)之一。<

3、br>　　 當(dāng)發(fā)生多種輪狀病毒混合感染時(shí),病毒基因片段可以發(fā)生重組,從而產(chǎn)生新的病毒株,重組可以發(fā)生在輪狀病毒人株之間以及人株和動(dòng)物株之間,產(chǎn)生了輪狀病毒基因多樣性,使輪狀病毒的流行株隨時(shí)間和地區(qū)不同而發(fā)生變異,給疫苗研究帶來(lái)一定的挑戰(zhàn)。特別是疫苗引入之后,可能對(duì)輪狀病毒的流行株起到選擇性作用,出現(xiàn)少見(jiàn)病毒株在人群中形成的爆發(fā)流行。所以我們有必要對(duì)輪狀病毒的感染情況,尤其是病毒株的分布情況進(jìn)行深入的流行病學(xué)調(diào)查研究,從而及時(shí)發(fā)現(xiàn)新的流

4、行株的出現(xiàn),更好的為疫苗研究服務(wù)。
　　 新生兒輪狀病毒感染具有不同于嬰幼兒感染的特點(diǎn),主要是醫(yī)院獲得性感染且可在嬰兒室中呈現(xiàn)暴發(fā)流行難以控制,同一病毒株的感染可持續(xù)數(shù)年,并且已經(jīng)有人推測(cè)感染新生兒的輪狀病毒株可能成為當(dāng)?shù)厣鐓^(qū)內(nèi)隨后蔓延的新的病毒株的來(lái)源。所以在新生兒中對(duì)輪狀病毒感染株的監(jiān)測(cè)有可能早期發(fā)現(xiàn)新的流行株的出現(xiàn),及時(shí)納入疫苗研究中,以預(yù)防少見(jiàn)輪狀病毒株引起的感染大規(guī)模流行。
　　 之前對(duì)于腹瀉期間腸道共生菌群變

5、化的研究主要是應(yīng)用經(jīng)典的糞便細(xì)菌培養(yǎng)的方法,較早期的關(guān)于這方面的研究表明在兒童急性腹瀉期間腸道菌群由原來(lái)的以厭氧菌為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐孕柩蹙鸀橹?而對(duì)于輪狀病毒感染和腸道菌群變化的關(guān)系,國(guó)內(nèi)外研究比較少見(jiàn)且存在分歧。
　　 本次研究通過(guò)調(diào)查2009年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒輪狀病毒感染的主要流行株,以了解新生幾輪狀病毒的流行病學(xué)特點(diǎn)及與臨床的關(guān)系,為疫苗的研究提供分子流行病學(xué)基礎(chǔ),并通過(guò)檢測(cè)新生兒糞便中β-葡萄糖苷酶、β-葡糖醛

6、酸糖苷酶以及尿素酶的活性,了解其在發(fā)生輪狀病毒感染時(shí)腸道微生態(tài)的變化情況,為臨床治療提供依據(jù)。
　　 方法:收集2009年3月-12月,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒病區(qū)腹瀉病人糞便標(biāo)本,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷為輪狀病毒感染的新生兒糞便標(biāo)本共100份,根據(jù)編碼組特異性抗原的基因VP6設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增特異性VP6基因片段,并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳以確定為輪狀病毒感染,陽(yáng)性者再進(jìn)一步進(jìn)行G、P基因分型。設(shè)計(jì)針對(duì)最常見(jiàn)流行株G1-G

7、4的特異性引物,進(jìn)行G基因分型;P分型主要是根據(jù)流行株P(guān)[4]、P[6]、P[8]分別設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行RT-PCR?；驍U(kuò)增結(jié)果進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,根據(jù)特征性分子量部位的條帶判斷基因型別。分別測(cè)定輪狀病毒腸炎組和對(duì)照組新生兒糞便中尿素酶、β-葡萄糖苷酶以及β-葡糖醛酸糖苷酶的活性,了解腸道微生態(tài)的變化情況。同時(shí)對(duì)RV感染組病例的臨床資料(包括:年齡、性別、分娩方式、喂養(yǎng)方式、腹瀉天數(shù)、每日大便最高次數(shù)、發(fā)熱和嘔吐情況)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以

8、了解新生兒輪狀病毒腸炎的臨床特征。
　　 結(jié)果:研究期間感染新生兒的輪狀病毒基因型均為G3P[8]。輪狀病毒感染組糞便尿素酶和β-葡糖醛酸糖苷酶的活性均顯著高于對(duì)照組,差異具有顯著性意義(P=0.000);輪狀病毒感染組β-葡萄糖苷酶活性與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(P=0.256)。浙江省新生兒輪狀病毒感染的季節(jié)性特征為院內(nèi)感染高峰發(fā)生在1-3月和10-12月;社區(qū)感染高峰是4、5月。臨床癥狀嚴(yán)重性比較:社區(qū)獲得性感染與院內(nèi)感染相比

9、、早產(chǎn)兒和足月兒相比差異無(wú)顯著性意義(P＞0.05);分娩方式和喂養(yǎng)方式相比較臨床嚴(yán)重性也無(wú)明顯差異(P均大于0.05);出生7天以?xún)?nèi)發(fā)生感染的新生兒臨床癥狀,包括發(fā)熱、腹瀉和嘔吐的嚴(yán)重性評(píng)分值低于出生7天后發(fā)生感染的新生兒(P＜0.05)。在主要臨床癥狀中發(fā)熱和嘔吐出現(xiàn)的頻率院內(nèi)感染和社區(qū)獲得性感染沒(méi)有明顯差異(P＞0.05),而院內(nèi)感染組新生兒大便次數(shù)增加出現(xiàn)的頻率明顯高于社區(qū)獲得性感染組,大便性狀改變即出現(xiàn)水樣便或蛋花湯樣便的頻率

10、社區(qū)感染組要比院內(nèi)感染組高,P值均小于0.05,差異具有顯著性意義。
　　 結(jié)論:1、輪狀病毒是引起新生兒院內(nèi)感染的主要病原體。2009年浙江省新生兒輪狀病毒感染的流行株為G3P[8]型,未檢測(cè)出其他病毒株;
　　 2、輪狀病毒感染后有可能引起腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化。
　　 3、新生兒感染輪狀病毒后其臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度與感染年齡和喂養(yǎng)方式有關(guān),與其它因素?zé)o關(guān)。
　　 4、新生兒感染輪狀病毒的方式(院內(nèi)獲得性感