人體尿液中蝶呤類化合物的分析方法研究.pdf

1、本文綜述了當(dāng)前臨床上惡性腫瘤的診斷手段、腫瘤標(biāo)志物的分類及惡性腫瘤早期診斷的研究方向，并從檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用領(lǐng)域兩大方面對(duì)蝶呤類化合物的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了概述。建立了三種分析方法分別應(yīng)用于健康人及癌癥病人尿液中蝶呤類化合物的檢測(cè)，為探討蝶呤類化合物與癌癥的關(guān)聯(lián)性奠定了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本文主要研究結(jié)果如下： 1．簡(jiǎn)單介紹了惡性腫瘤的發(fā)病趨勢(shì)，說(shuō)明了惡性腫瘤早期診斷的重要性，并對(duì)腫瘤病理診斷的新技術(shù)進(jìn)行了歸納，進(jìn)一步闡明了采用單項(xiàng)或多項(xiàng)

2、腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合進(jìn)行檢查成為了早期腫瘤診斷的重要檢測(cè)方法的意義所在。另一方面，還總結(jié)了用于臨床診斷的腫瘤標(biāo)志物的種類，并就目前國(guó)內(nèi)外正在開展的研究方向進(jìn)行了討論，探索和找尋新的特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤標(biāo)志物和探索多腫瘤標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)的方法，成為了各相關(guān)領(lǐng)域科學(xué)家們共同努力的方向。同時(shí)蝶呤類化合物在臨床上已有一定的研究，尤其以新蝶呤和生物蝶呤的研究較多，本章從檢測(cè)方法和應(yīng)用領(lǐng)域兩大方面對(duì)蝶呤類化合物的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了概述。 2．建立了

3、一種同時(shí)分離測(cè)定人尿中四種蝶呤類化合物(新蝶呤、異黃蝶呤、蝶呤和生物蝶呤)的高效液相色譜-熒光檢測(cè)法。采用SHIMADZU色譜柱Shim-pack：ODS(250×4.6 mm 5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(體積比為7:93)，流速為1mL/min，熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為Ex 35nm，Em．440 nm，柱溫為室溫的色譜條件，尿液經(jīng)0.45 μm的一次性濾膜過(guò)濾后進(jìn)行色譜分析。四種蝶呤類化合物在健康人尿樣中三個(gè)添加水平的平均回收率分別為：新蝶呤

4、(88.0％-106.2％)，蝶呤(100.3％-102.6％)，生物蝶呤(93.2％-96.9％)，異黃蝶呤(93.3％-102.4％)；四種蝶呤類化合物在癌癥病人尿樣中三個(gè)添加水平的平均回收率分別為：新蝶呤(81.16％-103％)，蝶呤(98.0％-99.8％)，生物蝶呤(94.8％-95.3％)，異黃蝶呤(92.1％-103％)。將方法應(yīng)用于健康人與癌癥病人尿液中該四種蝶呤類化合物的檢測(cè)，結(jié)果較好。 3．采用偏最小二乘

5、法結(jié)合同步熒光掃描技術(shù)對(duì)人尿中黃蝶呤含量進(jìn)行了測(cè)定。系統(tǒng)探討了同步熒光掃描的最佳實(shí)驗(yàn)條件，考察了主成分回歸法(PCR)、偏最小二乘法(PLS)、經(jīng)典最小二乘法(CLS)和徑向基人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(RBF-ANN)等多元校正法對(duì)蝶呤類化合物復(fù)雜多組分體系的解析能力，最終以偏最小二乘法(PLS)的分析結(jié)果最好，其標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.29％。該方法簡(jiǎn)便、快速，避免了較繁瑣的樣品前處理過(guò)程，應(yīng)用于人尿中黃蝶呤分析，結(jié)果令人滿意。 4.研究了一種測(cè)

6、定人尿中異黃蝶呤的同步熒光分析方法。在KHzP04-NaOH緩沖溶液中(pH 7．8)，波長(zhǎng)差(△柚為65—13133的條件下進(jìn)行同步熒光掃描，可有效排除尿液中其它物質(zhì)對(duì)異黃蝶呤測(cè)定的干擾。異黃蝶呤添加到健康人和胃癌病人尿樣中的平均回收率分別在102．9％．108．4％及85．6％．95．6％之間，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0．37％．1．25％及1．01％．2．25％。方法成功應(yīng)用于人尿中異黃蝶呤含量的測(cè)定，并通過(guò)T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所檢測(cè)的健康人