色素上皮衍生因子多肽對氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜病新生血管的抑制作用.pdf

1、目的:觀察本課題組自行研制的色素上皮衍生因子(PEDF)多肽對高氧誘導(dǎo)新生小鼠視網(wǎng)膜病新生血管的抑制作用。
　　方法:C57BL/6J新生小鼠在生后(P)第7天至12天日齡(P7～P12)吸入75％高氧后，返回空氣中，制備氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病(OIR)小鼠模型。通過兩種方式給予OIR小鼠PEDF多肽，即玻璃體腔內(nèi)注射和直接滴眼。玻璃體腔內(nèi)注射組選擇右眼注射，采用不同的注射濃度（0.5μg/μL，1μg/μL，2μg/μL），注射量均為1

2、μL，注射時間均為P12、P14各一次，左眼作為自身對照。直接滴眼組亦采用不同的滴眼濃度（0.5μg/μL，1μg/μL，2μg/μL），滴入量均為3μL，滴入時間均為P12～P16連續(xù)5d，每天一次。各組在P17取材做視網(wǎng)膜鋪片和切片，對視網(wǎng)膜新生血管進行形態(tài)觀察和新生血管內(nèi)皮細胞核計數(shù)的定量研究。最后，各組取最低劑量的亞組，通過實時熒光PCR及免疫組化的方式，檢測各亞組PEDF-mRNA及PEDF蛋白的表達水平，與OIR組及空氣組進

3、行對比。
　　結(jié)果:(1)注射組不同給藥濃度結(jié)果:在P12、P14各一次右眼注射3種劑量的PEDF多肽，計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管內(nèi)皮細胞核，結(jié)果顯示0.5μg/μL，1μg/μL，2μg/μL組右眼細胞核數(shù)分別為（44.41±1.46）個、（43.46±1.20）個、（38.06±0.95）個，其中0.5μg/μL與1μg/μL組無統(tǒng)計學(xué)差異，2μg/μL組細胞核數(shù)低于1μg/μL組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。三組右

4、眼細胞核數(shù)均低于OIR組（69.51±1.74個），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。三組右眼細胞核數(shù)亦均低于左眼組（69.12±1.60個），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。而OIR組與玻璃體腔內(nèi)注射左眼組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.839)。(2)滴眼組不同給藥濃度結(jié)果:在P12～P16連續(xù)5d每天一次雙眼滴入3種劑量的PEDF多肽，計數(shù)新生血管內(nèi)皮細胞核，結(jié)果顯示0.5μg/μL，1μg/μL，2μg/μL組細胞核數(shù)分別為

5、（48.81±1.18）個、(52.85±1.68)個、（50.96±1.72）個，三組之間兩兩比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。三組細胞核數(shù)均低于OIR組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。(3)注射組及滴眼組抑制血管新生作用的比較:結(jié)果顯示注射組細胞核數(shù)均低于滴眼組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。(4)實時熒光PCR檢測空氣組、OIR組、0.5μg/μL注射組（OIR iv0.5μg/μL組）、0.5μg/μL滴眼組（OI

6、R dr0.5μg/μL組）視網(wǎng)膜PEDF-mRNA表達水平:結(jié)果顯示后三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異，但均低于空氣組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。(5)免疫組化檢測空氣組、OIR組、OIR iv0.5μg/μL組、OIR dr0.5μg/μL組視網(wǎng)膜色素上皮層PEDF蛋白表達水平:結(jié)果顯示后三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異，但均低于空氣組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:玻璃體腔內(nèi)注射PEDF多肽及直接滴入PEDF多肽均能對高