中國地方綿羊品種PRNP基因研究.pdf

1、綿羊PRNP的多態(tài)性與綿羊對癢病的易感性有關，特別是PRNPl36，154和171位點。從我國lO省份采集了24個我國主要地方綿羊品種的血液樣品668份，提取綿羊基因組DNA，用PCR方法擴增綿羊PRNP基因，通過序列測定，對它們的PRNP基因多態(tài)性進行分析，以確定PRNP的多態(tài)性情況以及這些綿羊品種對癢病的感染風險。研究發(fā)現了PRNP編碼區(qū)21、85、101、112、127、138、141、143、146、153、154、171和18

2、9一共13位點的基因多態(tài)性，其中21、85和143位點的多態(tài)性為首次發(fā)現。值得注意的是，在本次研究中沒有發(fā)現136位點丙氨酸(A)／纈氨酸(V)的多態(tài)性，136位點均為純合的A。而154位點精氨酸(R)／組氨酸(H)的多態(tài)性與先前的研究一致，H的多態(tài)性也比較少。在171位點發(fā)現了谷氨酰胺(Q)，R，H或賴氨酸(L)四種多態(tài)性變化。由于易感等位基因ARQ的等位基因頻率高達78.14％，所以調查的羊群對于感染癢病均存在較高的風險。

3、根據綿羊PRNP因序列設計了針對407、461、512和513位點SNP多態(tài)性的上下游引物和探針，建立了檢測綿羊PPdV／q136、154、171位點基因型的TaqMan探針Real-time PCR方法。本方法用于檢測綿羊PRNP基因型具有簡便快速，結果直觀，容易判讀等優(yōu)點，可以用于大量綿羊樣品的PRNP瑾因分型，適合于在大部分具有標準設備的分子生物學實驗應用。用本方法檢測了200份藏羊的PRNP基因型，結果發(fā)現藏羊的PRNP基因型主

4、要為ARQ／ARQ，其次為ARQ／ARR，還有少量的ARQ／VRQ，ARQ／AHQ基因型。 根據Genbank中綿羊PrP基因全序列和表達載體pET28a載體和pFMDHZ—α—A的多克隆位點設計了針對綿羊PrP前體蛋白基因引物，以綿羊基因組DNA為模板，PCR擴增綿羊PrP前體蛋白基因，通過酶切、連接，將本基因克隆到原核表達載體pET28a(+)和真核表達載體pFMDHZ—α—A中，構建了重組原核表達載體pET28a—OPrP