EPEC胃腸感染小鼠模型血漿Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞因子變化及意義.pdf

1、目的:兒童感染性腹瀉病中關(guān)于CD4+T淋巴細(xì)胞亞群及其代表因子的研究在輪狀病毒性腹瀉中多有報(bào)道,在細(xì)菌性腹瀉病例中此類研究少有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用EPECE2348/69型給昆明小鼠灌胃,模仿人類胃腸感染主要感染途徑(經(jīng)口感染),制造人類細(xì)菌感染性腹瀉疾病動(dòng)物模型。檢測(cè)小鼠發(fā)病時(shí)的外周血漿中的Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞代表因子的水平,探索小鼠胃腸道感染時(shí)的免疫反應(yīng)變化。
　　對(duì)象與方法:研究對(duì)象:普通健康昆明小鼠40只,分成生理

2、鹽水對(duì)照組(20只)和實(shí)驗(yàn)組(20只)。實(shí)驗(yàn)組給予EPEC-E2348/69混懸液灌胃,濃度5×108CFU/ml,劑量0.5ml。對(duì)照組處理因素將EPEC混懸液更換為生理鹽水,余同實(shí)驗(yàn)組。灌胃8小時(shí)后觀察小鼠的大便性狀、精神狀態(tài)、行為動(dòng)作,計(jì)算腹瀉指數(shù)、腹瀉率、糞便培養(yǎng)EPEC檢出率。灌胃前及灌胃后24h取小鼠外周血行血細(xì)胞分析,細(xì)菌灌胃后24h取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組外周血,離心后取血漿。采用CBA技術(shù)檢測(cè)血漿中的IL-2、TNF、IFN-

3、γ、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17A淋巴細(xì)胞因子水平。
　　結(jié)果:
　　1.小鼠感染性腹瀉動(dòng)物模型制備成功,實(shí)驗(yàn)組小鼠灌胃前WBC(7.45±1.86)×109較灌胃后24小時(shí)WBC(6.22±1.42)×109差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.013<0.05)。N(％)、L(%)灌胃前后雖有改變但未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.071,0.076>0.05);實(shí)驗(yàn)組腹瀉指數(shù)(1.12±0.66)高于對(duì)照組(0.00±0.00

4、)且有統(tǒng)計(jì)差異(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組腹瀉率(85%)及糞便培養(yǎng)EPEC檢出率(75%)高于對(duì)照組0%;細(xì)菌灌胃后約8小時(shí)小鼠出現(xiàn)倦怠、精神萎靡、行動(dòng)遲緩,部分小鼠出現(xiàn)粘液便、稀便,部分小鼠出現(xiàn)松軟大便(較正常糞便含水多)。對(duì)照組小鼠大便性狀及精神狀態(tài)等無明顯改變。
　　2.小鼠灌胃24h后外周血漿中Th1細(xì)胞因子:IL-2實(shí)驗(yàn)組(2.56±0.31)pg/ml較對(duì)照組(2.25±0.31)pg/ml升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0

5、.006),實(shí)驗(yàn)組TNF(11.89±3.12)pg/ml、IFN-γ(25.45±69.20)pg/ml較對(duì)照組TNF(10.42±3.35)pg/ml、IFN-γ(7.45±7.80)pg/ml水平升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.164,0.262);Th2細(xì)胞因子:實(shí)驗(yàn)組IL-6(16.71±19.64)pg/ml、IL-10(12.11±3.61)pg/ml、IL-4(3.10±0.62)pg/ml與對(duì)照組IL-6(5.96±

6、6.75)pg/ml、IL-10(12.11±3.61)pg/ml、IL-4(2.54±0.24)pg/ml比較水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030,0.022,0.001);Th17細(xì)胞因子:IL-17A實(shí)驗(yàn)組(3.01±0.58)pg/ml較對(duì)照組(2.62±0.39)pg/ml升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.020)。
　　3.實(shí)驗(yàn)組Th1細(xì)胞因子總水平(39.91±71.00)pg/ml較對(duì)照組(20.13±10.4

7、6)pg/ml水平上升,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.237>0.05).實(shí)驗(yàn)組Th2細(xì)胞因子總水平(34.84±20.06)pg/ml較對(duì)照組(20.62±8.37)pg/ml水平上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007<0.05).實(shí)驗(yàn)組Th1/Th2比例(0.975)較對(duì)照組(1.024)有所降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.832>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)口灌喂EPEC感染小鼠,模仿人類胃腸感染主要

8、誘發(fā)途徑(經(jīng)口感染),人類細(xì)菌感染性腹瀉疾病動(dòng)物模型復(fù)制成功。
　　2.EPEC感染小鼠后,小鼠外周血漿中IL-2、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17A淋巴細(xì)胞因子水平明顯升高,Th1/Th2/Th17細(xì)胞(因子)均參與了免疫反應(yīng)過程,小鼠胃腸道感染后體內(nèi)炎癥反應(yīng)是一個(gè)整體和動(dòng)態(tài)過程。
　　3.EPEC感染小鼠后,小鼠體內(nèi)以Th2細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫為主,Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在炎癥反應(yīng)過程中占非主導(dǎo)地位。