煙草煙霧暴露肺氣腫小鼠肺部Th1和Th17的變化及氨茶堿干預(yù)的作用.pdf

1、目的：觀察煙草煙霧暴露肺氣腫小鼠以及加入氨茶堿干預(yù)后肺部Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞的變化，探討Th1和Th17在煙草煙霧誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生肺部炎癥及肺氣腫中的作用，以及氨茶堿干預(yù)對(duì)Th1和Th17變化的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：將30只清潔級(jí)健康雄性Balb/c小鼠隨機(jī)均分為3組:對(duì)照組、模型組、氨茶堿處理組，每組10只小鼠。采用單純煙熏法復(fù)制肺氣腫小鼠模型，模型組及氨茶堿處理組予煙草煙霧暴露，對(duì)照組予空氣偽暴露，各組小鼠暴露時(shí)間均為

2、28周，于第25周開始予氨茶堿處理組小鼠腹腔注射氨茶堿，予對(duì)照組及模型組注射生理鹽水，制備模型期間觀察各組小鼠的一般情況，于第28周末處置并收集標(biāo)本。采用蘇木素-伊紅染色法(HE染色法)觀察各組小鼠氣道及肺組織的病理形態(tài)學(xué)改變，計(jì)算平均內(nèi)襯間隔(MLI)及肺泡破壞指數(shù)(DI);采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)及肺組織勻漿上清液中細(xì)胞因子γ-干擾素(IFN-γ)和白細(xì)胞介素-17(IL-17)的水

3、平;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)各組小鼠肺組織中Th1與Th17的轉(zhuǎn)錄因子T-bet與RORγt的mRNA表達(dá)水平。比較分析這些指標(biāo)的變化意義及可能的相關(guān)機(jī)制。
　　結(jié)果：(1)與對(duì)照組相比，模型組小鼠的肺組織結(jié)構(gòu)破壞，內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁變薄或斷裂，肺泡腔擴(kuò)大融合形成肺大皰，部分肺泡腔內(nèi)可見不同程度的出血、水腫，支氣管粘膜上皮脫落，粘膜下成纖維細(xì)胞增生，支氣管平滑肌明顯增生增厚，杯狀細(xì)胞顯著增多;氨

4、茶堿處理組小鼠的肺組織病理形態(tài)學(xué)改變較正常組小鼠明顯，與模型組小鼠相比較，氨茶堿處理組小鼠的肺氣腫程度和炎癥反應(yīng)有所減輕，但仍然沒有完全恢復(fù)正常的肺組織結(jié)構(gòu)。(2)模型組和氨茶堿處理組小鼠的MLI及DI均明顯高于對(duì)照組，以模型組升高更為明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);氨茶堿處理組小鼠的MLI及DI較正常組增高，但與模型組相比有所減輕，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)模型組和氨茶堿處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的IFN-

5、γ及IL-17細(xì)胞因子水平[（481.66±92.38）和(377.6±59.05)]及[（866.55±166.72）和（578.61±227.99）]均比對(duì)照組[(292.06±90.9)和（312.08±117.19）]明顯升高，以模型組升高更為明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;模型組和氨茶堿處理組小鼠肺組織勻漿上清液中的IFN-γ及IL-17細(xì)胞因子水平[（1277.3±71.66）和（1003.1±129.33）]及[

6、（1271.04±63.48）和（1110.89±55.06）]均比對(duì)照組[（631.22±265.77）和（855.88±62.33）]明顯升高，以模型組升高更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)氨茶堿處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的IFN-γ及IL-17細(xì)胞因子水平[（377.6±59.05）及（578.61±227.99）]較對(duì)照組[(292.06±90.9)及（312.08±117.19）]升高，但與模型組[（481.

7、66±92.38）及(866.55±166.72)]相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);同時(shí)，氨茶堿處理組小鼠肺組織勻漿上清液中的IFN-γ及IL-17細(xì)胞因子水平[(1003.1±129.33)及（1110.89±55.06）]較對(duì)照組[(631.22±265.77)及(855.88±62.33)]升高，但與模型組[（1277.3±71.66）及（1271.04±63.48）]相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）

8、。(5)模型組和氨茶堿處理組小鼠肺組織中的T-bet及RORγt的mRNA相對(duì)表達(dá)量[（1.89±0.22）和(1.39±0.30)]及[（2.14±0.12）和（1.65±0.10）]均比對(duì)照組[（0.91±0.11）和(1.06±0.07)]明顯升高，以模型組升高更為明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(6)氨茶堿處理組小鼠肺組織中的T-bet及RORγt的mRNA相對(duì)表達(dá)量[（1.39±0.30）及（1.65±0.10）]較

9、對(duì)照組[（0.91±0.11）及（1.06±0.07）]升高，但與模型組[（1.89±0.22）及（2.14±0.12）]比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)在煙草煙霧暴露肺氣腫小鼠的肺部中Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞均上調(diào)，提示Th1和Th17可能共同參與了小鼠肺部炎癥及肺氣腫的形成。
　　(2)氨茶堿在減輕肺氣腫模型小鼠氣道和肺組織炎癥反應(yīng)的同時(shí)，可以下調(diào)由煙草煙霧暴露誘導(dǎo)產(chǎn)生的Th1和Th17