Th17、Th1和Tc1細胞亞群在慢性乙型肝炎及慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者中的變化及意義.pdf

1、第一部分Th17、Th1和Tc1細胞亞群在慢性乙型肝炎患者中的變化及意義
　　 慢性乙型肝炎的發(fā)病機制十分復雜,宿主免疫調節(jié)的紊亂是導致病毒不能有效清除、病情遷延不愈、引起慢性炎癥、造成肝臟病變的重要因為。許多研究表明Th1、Th2細胞亞群的比例失衡、功能失調是導致慢性乙肝發(fā)病的重要因素。傳統(tǒng)上,CD4+輔助T細胞(Th)和CD8+細胞毒性T細胞(Tc)根據各自分泌的細胞因子的不同,可以將T細胞分為兩類:Ⅰ類T細胞(Th1和Tc

2、l,合稱T1)和Ⅱ類T細胞(Th2和Tc2,合稱T2),前者主要分泌干擾素γ(IFN-γ)、白細胞介素(IL)-2、腫瘤壞死因子(TNF)-β,后者主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13,并且常以IFN-γ/IL-4代表T1/T2的比例。T1和T2在免疫調節(jié)中均發(fā)揮重要作用,它們各自分泌的細胞因子對免疫應答效應起關鍵作用。CD8+T細胞可分為Tc1和Tc2兩個細胞亞群,Tc1與Th1亞群相似,可分泌IL-2、IFN

3、-γ等細胞因子并且可發(fā)揮細胞毒作用。
　　 Th17細胞是最近發(fā)現的一種新的效應性CD4+T細胞亞群,以產生分泌白介素17(IL-17)為特征。Th17細胞與Th1和Th2細胞無論在分化途徑、信號轉導還是生物學功能等方面均有所不同。大量證據表明Th17細胞通過產生IL-17作用于不同的靶細胞,誘導其他細胞因子產生,參與細胞因子網絡調節(jié),觸發(fā)炎癥遞質釋放,從而介導炎性反應(防御胞外病原菌的感染)、自身免疫性疾病、腫瘤和移植排斥等病

4、理狀態(tài)的發(fā)生和發(fā)展。迄今為止,有關慢性乙型肝炎患者外周血中Th17細胞的研究報道很少。
　　 目的：
　　 本研究的目的是通過對慢性乙型肝炎患者外周血Th17、Th1和Tc1細胞亞群及血漿細胞因子的檢測,進一步探討三種細胞亞群在慢性乙型肝炎患者發(fā)病機制中的作用及評價它們的臨床相關性。
　　 方法：
　　 應用三色流式細胞術檢測慢性乙型肝炎患者和正常對照外周血中Th1、Th17和Tc1細胞占CD3+T細胞的

5、比例。三種細胞亞群的界定分別為:Th17細胞為CD3+CD8-IL-17A+,Th1細胞為CD3+CD8-IFN-γ+,Tc1細胞為CD3+CD8+IFN-γ+；應用ELISA技術檢測慢性乙型肝炎患者和正常對照血漿中IL-17和IFN-γ的表達水平。應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測IL-17及IFN-γ在慢性乙型肝炎患者和正常對照外周血單個核細胞中的表達。
　　 結果：
　　 1、慢性乙型肝炎患者外周血Th

6、1細胞的比例(8.55±1.53％)明顯低于正常對照組(10.56±1.91％)(P<0.01),并且慢性乙型肝炎患者Tcl細胞的比例(6.35±1.85％)較正常對照組(9.0±2.79％)亦顯著降低(P<0.05)。
　　 2、慢性乙型肝炎患者Th17細胞的比例(1.53±0.52％)較正常對照(0.92±0.20％)顯著升高(P<0.05)。
　　 3、在慢性乙型肝炎患者中,Th1與Tc1細胞間存在明顯的正相關性(

7、r=0.58,P<0.05),Th17與Th1細胞間亦存在顯著的負相關性(r=-0.56,P<0.05),但Th17與Tc1細胞間無相關性。
　　 4、慢性乙型肝炎患者血漿中IFN-γ和IL-17表達水平與正常對照相比均無顯著性差異。
　　 5、在慢性乙型肝炎患者中,外周血中Th17細胞亞群的比例與ALT呈明顯正相關(r=0.66,P<0.05)。慢性乙型肝炎患者外周血中Th1細胞亞群的比例與ALT呈顯著負相關(r=-0

8、.68,P<0.05)。
　　 結論：
　　 我們的研究結果進一步表明,在慢性乙型肝炎的異常免疫反應中,Th1和Tc1型免疫反應受到抑制。尤為重要的是,我們研究首次表明,在慢性乙型肝炎發(fā)生和發(fā)展中,Th17細胞亞群比例增加可能是一個重要的決定因素,調節(jié)慢性乙型肝炎患者中Th17細胞的異?？赡艹蔀槁砸倚透窝字委煹男虏呗?。
　　 第二部分Th17、Th1和Tc1細胞亞群在慢加急性重型乙型病毒性肝炎患者中的變化及意義

9、
　　 HBV感染可引起人類急慢性肝炎,與肝硬化和肝細胞癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關,我國是乙型肝炎的高發(fā)區(qū),在全球3.5億HBV攜帶者中,約9300萬,發(fā)展為慢性乙型肝炎的患者大約有2500萬,其中每年約有1％的乙型肝炎患者發(fā)展為重型肝炎。重型肝炎(肝衰竭)可被分為四類:急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)、亞急性肝衰竭(subacute liver failure,SALF)、慢加急性肝衰竭(acute-o

10、n-chronicliver failure,ACLF)和慢性肝衰竭(chronic liver failure,CLF)。慢加急性肝衰竭是在慢性肝病基礎上出現的急性肝臟功能失代償。
　　 在我們的第一部分實驗中,我們已經發(fā)現慢性乙型肝炎患者外周血中Th1,Tc1細胞的比例明顯低于正常對照。提示患者細胞免疫功能低下,不能有效清除體內的HBV,使HBV持續(xù)感染形成慢性化。Th17細胞亞群比例增加可能是一個重要的決定因素。
　

11、　 在我國,慢性乙型病毒性肝炎是引起慢加急性肝衰竭的主要病因,有報道稱CHB占ACLF所有病因的80％。由慢性乙型病毒性肝炎所致的慢加急性肝衰竭又稱為慢加急性重型乙型病毒性肝炎(ACHBLF)。ACHBLF進展迅速,病情兇險,臨床上缺乏特異、有效的治療手段,絕大部分患者預后較差,易出現各種并發(fā)癥而危及患者的生命,雖然近年來在ACHBLF的發(fā)病機制、臨床診斷、治療等方面取得了很大的進展,但死亡率仍高達50％-60％。目前,慢性乙型肝炎出

12、現急性肝功能失代償引起ACHBLF精確機制尚不明確,明確其發(fā)病機制必將提高ACHBLF的治療水平,降低其死亡率。
　　 目的：
　　 本研究的目的是通過對慢加急性乙型病毒性肝炎患者外周血Th17、Th1和Tc1細胞亞群及血漿細胞因子的檢測,進一步探討三種細胞亞群在慢加急性乙型病毒性肝炎患者發(fā)病機制中的作用。
　　 方法：
　　 應用三色流式細胞術檢測慢加急性乙型病毒性肝炎患者和正常對照外周血中Th1、Th

13、17和Tcl細胞占CD3+T細胞的比例。三種細胞亞群的界定分別為:Th17細胞為CD3+CD8-IL-17A+,Th1細胞為CD3+CD8-IFN-γ+,Tc1細胞為CD3+CD8+IFN-γ+；應用ELISA技術檢測慢加急性乙型病毒性肝炎患者和正常對照血漿中IL-17和IFN-γ的表達水平。
　　 結果：
　　 1、慢加急性乙型病毒性肝炎患者外周血Thl細胞的比例(8.55±1.53％)明顯低于正常對照組(10.56±

14、1.91％)(P<0.01),并且慢加急性乙型病毒性肝炎患者Tc1細胞的比例(6.35±1.85％)較正常對照組(9.0±2.79％)亦顯著升高(P<0.05)。
　　 2、慢加急性乙型病毒性肝炎患者Th17細胞的比例(1.53±0.52％)較正常對照(0.92±0.20％)顯著升高(P<0.05)。
　　 3、在慢加急性乙型病毒性肝炎患者中,Th17與Th1細胞間亦存在顯著的正相關性(r=0.61,P<0.05),但T

15、h17與Tc1細胞間無相關性。
　　 4、慢加急性乙型病毒性肝炎患者血漿中IFN-γ和IL-17表達水平與正常對照相比均無顯著性差異。
　　 結論：
　　 我們的研究結果進一步表明,在慢加急性乙型病毒性肝炎的異常免疫反應中,Th1和Tc1型免疫反應占優(yōu)勢地位,并且Tc1細胞在慢加急性乙型病毒性肝炎的發(fā)病中可能發(fā)揮了細胞毒作用和免疫調節(jié)的雙重作用。尤為重要的是,我們研究首次表明,在慢加急性乙型病毒性肝炎發(fā)生和發(fā)展中