兔VX2惡性胸腔積液模型的建立及凝血醇、滑石粉對惡性胸腔積液治療機制的研究.pdf

1、目的:惡性胸腔積液(Malignantpleuraleffusion，MPE)是指惡性腫瘤轉(zhuǎn)移至胸膜或胸膜原發(fā)腫瘤所致的胸腔積液。MPE的產(chǎn)生往往標(biāo)志著病情已進入晚期，大多沒有手術(shù)機會。治療的目的是減少積液的產(chǎn)生，提高生存質(zhì)量，盡量延長患者的生存期。目前多采用小口徑胸腔引流管引流積液，并向胸腔內(nèi)注入藥物行胸膜固定。應(yīng)用凝血酶、滑石粉作為胸腔粘連劑治療胸腔積液由來已久，但其治療機制及粘連效果尚不完全明確。本研究旨在通過向兔胸腔內(nèi)注入VX2

2、(一種由shope病毒所誘發(fā)的乳頭瘤衍生的鱗癌)組織懸液建立MPE模型，給予凝血酶、滑石粉治療MPE，以此研究和探討凝血酶、滑石粉在治療MPE中的治療機制。
　　 方法:選取健康新西蘭白兔（8-10月齡，雌雄各半，體重3kg左右）給予右側(cè)胸腔內(nèi)注入VX2組織懸液1.5ml，經(jīng)B超定位有胸腔積液產(chǎn)生(＞10ml)，抽取積液行脫落細(xì)胞學(xué)檢查，找到癌細(xì)胞后，即證實為MPE模型成功。隨機把MPE模型分為4組，為凝血酶低劑量組（10只）、

3、凝血酶高劑量組（10只）、滑石粉組（10只）和對照組（6只）。所有MPE模型均置小口徑胸腔引流管，用注射器抽盡積液，并記錄引流量。然后分別向胸腔注入藥物:凝血酶低劑量組給予200iu/kg的凝血酶溶液，凝血酶高劑量組給予400iu/kg的凝血酶溶液;滑石粉組給予100mg/kg的滑石粉混懸液（10％滑石粉混懸液）;對照組給予等量生理鹽水。分別在注藥當(dāng)天和注藥后48小時抽取胸腔積液做生化指標(biāo)檢測（包括葡萄糖、乳酸脫氫酶），并通過雙抗體夾心

4、酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測積液中纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的含量，并觀察引流液顏色和量的變化。實驗期間，實驗動物統(tǒng)一管理，飼養(yǎng)。待實驗兔死亡后，打開胸腔，觀察并進行各組胸腔粘連評分;取壁層胸膜組織做HE染色，用于鏡下觀察，測量胸膜厚度。
　　 結(jié)果:
　　 1.滑石粉組中有2只胸腔注藥后出現(xiàn)呼吸急促，鼻翼煽動，短時間內(nèi)死亡。凝血酶低劑量組中有10只、凝血酶高劑量組中有1

5、0只、滑石粉組中有8只和對照組中有6只順利完成實驗。
　　 2.復(fù)制MPE模型最短時間11天，最長時間23天，平均造模時間(17.10±2.79)天。
　　 3.胸腔注藥后的存活時間，凝血酶低劑量組(3.90±0.74)天、凝血酶高劑量組(6.90±1.20)天、滑石粉組(7.10±1.20)天，對照組(3.30±0.67)天;不同組間，凝血酶低劑量組和凝血酶高劑量組比較(P=0.000)、凝血酶低劑量組和滑石粉組比較(

6、P=0.000)、凝血酶高劑量組和對照組比較(P=0.000)、滑石粉組和對照組比較(P=0.000)均有顯著性差異。
　　 4.MPE模型中引流液顏色隨病情進展，有淡血性→血性→暗血性的變化趨勢。經(jīng)凝血酶、滑石粉治療后引流液顏色可變?yōu)榈曰虻S色。
　　 5.胸腔注藥后，積液引流量為凝血酶低劑量組(30.00±12.00)ml、凝血酶高劑量組(28.17±4.40)ml、滑石粉組(26.00±10.33)ml、對照組

7、(49.67±7.53)ml;不同組間，凝血酶高劑量組和對照組比較(P=0.004)、滑石粉組和對照組比較(P=0.006)均有顯著性差異。
　　 6.胸腔引流液的生化特征
　　 6.1葡萄糖(GLU)
　　 比較同一組治療前后，凝血酶低劑量組(P=0.000)、凝血酶高劑量組（P=0.005）、滑石粉組(P=0.012)、對照組(P=0.001)中葡萄糖較治療前有下降趨勢，有顯著性差異。
　　 不同組間

8、治療前后葡萄糖含量，凝血酶高劑量組和對照組比較(P=0.007)、滑石粉組和對照組比較(P=0.003)均有顯著性差異。
　　 6.2乳酸脫氫酶(LDH)
　　 比較同一組治療前后，凝血酶低劑量組(P=0.000)、凝血酶高劑量組(P=0.031)、滑石粉組(P=0.000)、對照組(P=0.000)中乳酸脫氫酶較治療前有增高趨勢，有顯著性差異。
　　 不同組間治療前后乳酸脫氫酶含量，凝血酶高劑量組和對照組比較（

9、P=0.006）、滑石粉組和對照組比較（P=0.004）、凝血酶低劑量組和滑石粉組比較(P=0.006)均有顯著性差異。
　　 7.胸腔引流液的細(xì)胞因子含量
　　 7.1PAI-1水平
　　 比較同一組治療前后，凝血酶低劑量組(P=0.007)、凝血酶高劑量組(P=0.008)、滑石粉組(P=0.009)中PAI-1水平較治療前升高，有顯著性差異。對照組(P=0.956)中治療前后無顯著性差異。
　　 不

10、同組間治療前后PAI-1水平，凝血酶高劑量組和對照組比較（P=0.005）、滑石粉組和對照組比較(P=0.007)有顯著性差異。
　　 7.2VEGF水平
　　 比較同一組治療前后，凝血酶低劑量組(P=0.453)、凝血酶高劑量組(P=0.388)、滑石粉組(P=0.802)、對照組(P=0.133)中VEGF水平無顯著性差異。
　　 不同組間治療前后VEGF水平，凝血酶低、高劑量組，滑石粉組、對照組之間比較，無

11、顯著性差異(x=1066，df=3，P=0.785)。
　　 8.胸腔粘連積分，凝血酶低劑量組、凝血酶高劑量組、滑石粉組分別和對照組比較，有顯著性差異(P=0.000);凝血酶低劑量組和凝血酶高劑量組比較(P=0.000)、凝血酶低劑量組和滑石粉組比較(P=0.000)有顯著性差異。
　　 9.胸膜病理觀察
　　 9.1鏡下所見
　　 對照組中壁層胸膜纖薄，結(jié)締組織中無炎細(xì)胞浸潤和成纖維細(xì)胞增生;凝血酶低

12、劑量組中壁層胸膜稍增厚，結(jié)締組織中多量淋巴細(xì)胞浸潤及成纖維細(xì)胞增生;凝血酶高劑量組中壁層胸膜明顯增厚，大量毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞增生及壞死;滑石粉組中壁層胸膜明顯增厚，大量毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞增生并包繞腫瘤組織。
　　 9.2胸膜厚度
　　 在高倍鏡下測量壁層胸膜厚度，凝血酶低劑量組為(0.308±0.016)mm、凝血酶高劑量組為(0.744±0.007)mm、滑石粉組為(1.508±0.043)mm、對照組為(0.10

13、7±0.058)mm。不同組間兩兩比較均有顯著性差異(P=0.004)。
　　 結(jié)論:
　　 1.VX2組織懸液法可短期內(nèi)復(fù)制MPE兔模型，方法簡單、成型率高。
　　 2.胸腔內(nèi)應(yīng)用凝血酶，使壁層胸膜增厚;通過減少纖溶酶原的激活使纖維蛋白沉積;刺激胸膜成纖維細(xì)胞增多，加速胸腔閉合;對降低VEGF無明顯作用。400iu/kg的凝血酶溶液治療MPE，安全有效，未見明顯副作用。
　　 3.胸腔內(nèi)應(yīng)用滑石粉，使壁