轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育多年生黑麥草耐鹽品種的研究.pdf

1、多年生黑麥草(LoliumperenneL.)是一種應(yīng)用廣泛的禾本科牧草和草坪草，在世界各地的溫帶地區(qū)均有分布，適宜在我國北方大部分地區(qū)種植。黑麥草喜歡溫涼濕潤的氣候，其個(gè)別品種具有較好的耐鹽耐旱性，但絕大多數(shù)品種耐鹽性較差，這限制了在我國北方地區(qū)的種植。為此，利用植物基因工程技術(shù)，進(jìn)行多年黑麥草抗旱耐鹽性的遺傳改良具有十分重要的意義。 本文研究分析鑒定了22種現(xiàn)有多年生黑麥草種質(zhì)資源的耐鹽性，篩選出優(yōu)良品系：評(píng)價(jià)了11個(gè)草坪型

2、多年生黑麥草品種在組織培養(yǎng)中的表現(xiàn)；通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將甜菜堿脫氫酶(BADH)基因?qū)攵嗄晟邴湶?，獲得具有抗旱耐鹽堿特性的多年生黑麥草新品種 1.多年生黑麥草種質(zhì)資源的抗旱耐鹽性的篩選本文應(yīng)用模糊隸屬函數(shù)法，以發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、葉片組織含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量和丙二醛含量對(duì)耐鹽性有不同程度貢獻(xiàn)的指標(biāo)為依據(jù)，對(duì)22個(gè)多年生黑麥草品種進(jìn)行了耐鹽性評(píng)定，結(jié)果表明，模糊隸屬函數(shù)法可以避免單一指標(biāo)的片面性，能較全面地評(píng)價(jià)黑麥草的耐鹽

3、性。將這22種個(gè)黑麥草品種耐鹽性可歸為四類，即強(qiáng)耐鹽性品種為：執(zhí)著和草坪星；較強(qiáng)耐鹽品種為愛神特、旋風(fēng)、頂峰、百嬉、APM、百尼牧、百瑰和百寶；中等耐鹽品種為牛頭、維多利亞、首相、馬蒂達(dá)、和平、百萊特、綠寶石、雅晴；不耐鹽品種為百樂、賽寶、百克來、海鷗。 2.多年生黑麥草組織培養(yǎng)再生體系的建立本研究以多年生黑麥草成熟種子為外植體，在不同的2，4-D和6-BA濃度下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)以及不同KT濃度下進(jìn)行植株再生，并且評(píng)價(jià)了11個(gè)草

4、坪型多年生黑麥草品種的愈傷組織誘導(dǎo)率和植株分化率。結(jié)果表明，在2,4-D5mg/L和6-BA0.05mg/L的濃度配比情況下，愈傷組織的質(zhì)量和誘導(dǎo)率最優(yōu)；愈傷組織的分化以附加6-BA3mg/L、NAA1mg/L以及KT1mg/L的MS培養(yǎng)基分化率最高。不同品種多年生黑麥草之間，愈傷組織誘導(dǎo)率和分化率存在明顯差異，總的植株再生率較高的品種有百尼牧、和平、綠寶石和首相。 3.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甜菜堿脫氫酶(BADH)基因?qū)Χ嗄晟邴湶莸霓D(zhuǎn)

5、化同一植物材料對(duì)不同的篩選劑的敏感性不同，另外不同的植物種類、不同的品種對(duì)同一篩選劑的敏感性也不同。本文建立了黑麥草抗性愈傷組織的篩選方案：潮霉素應(yīng)以30mg/L濃度下篩選60d或50mg/L濃度下篩選40d為宜。 利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，用甜菜堿脫氫酶(BADH)基因轉(zhuǎn)化多年生黑麥草愈傷組織，獲得17株經(jīng)PCR檢測(cè)和PCR-Southern分析為陽性的轉(zhuǎn)基因植株。田間實(shí)驗(yàn)證明，轉(zhuǎn)化植株具有很好的耐鹽性，在1.5％NaCl鹽濃度下生長