葛根素和還原型谷胱甘肽對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:探討葛根素對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stemcells,HucMSCs)生長(zhǎng)特性及成骨分化能力的影響,為臨床葛根素的應(yīng)用開(kāi)辟新途徑,提供新理論。研究還原型谷胱甘肽(GSH)對(duì)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(Humanumbilical cord mesenchymal stem cells,HucMSCs)生物學(xué)特性的影響,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步探討,為將來(lái)能夠體外長(zhǎng)期培養(yǎng)間質(zhì)干細(xì)胞提供

2、新方法。
　　 方法:①采用組織塊貼壁法獲得臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。②運(yùn)用MTT法檢測(cè)葛根素和GSH對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞增殖能力和生長(zhǎng)曲線的影響。③采用流式分析還原型谷胱甘肽對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞周期的影響。④取HucMSCs進(jìn)行成骨分化誘導(dǎo),用ALP細(xì)胞化學(xué)染色以及鈣基質(zhì)染色(Von Kossa法)比較細(xì)胞加藥誘導(dǎo)前后的變化,并提取RNA,檢測(cè)ALP基因水平的差異。⑤采用流式檢測(cè)在還原型谷胱甘肽的干預(yù)下特定濃度的醋酸鉛引起臍帶間質(zhì)干細(xì)胞凋亡的變

3、化。⑥采用試劑盒檢測(cè)還原型谷胱甘肽對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的影響。⑦采用Western blot檢測(cè)還原型谷胱甘肽對(duì)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞增殖蛋白ERK的影響。
　　 結(jié)果:①隨著葛根素濃度的升高,吸光度值(OD)逐漸下降。成骨誘導(dǎo)14天后,葛根素組ALP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯比對(duì)照組高；Von kossa染色結(jié)果顯示:葛根素組細(xì)胞外的鈣基質(zhì)沉積量比對(duì)照組高。成骨誘導(dǎo)第七天,葛根素組ALP基因表達(dá)

4、量比對(duì)照組高。②還原型谷胱甘肽組細(xì)胞周期與對(duì)照組相比S期升高。成骨誘導(dǎo)十四天染色,還原型谷胱甘肽處理組與對(duì)照組相比,ALP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯差別。與對(duì)照組相比還原型谷胱甘肽處理后細(xì)胞培養(yǎng)上清中MDA減少,SOD升高。細(xì)胞蛋白p-ERK／t-ERK的比值24 h的比0 h的高。流式分析結(jié)果顯示:還原型谷胱甘肽組凋亡細(xì)胞數(shù)比鉛處理組少。
　　 結(jié)論:①葛根素對(duì)人類(lèi)臍帶間質(zhì)干細(xì)(HucMSCs)活性能夠產(chǎn)生影響。在一定范圍內(nèi),低濃度的促