重金屬鉛、汞對臍帶間質干細胞生物特性的影響.pdf

1、目的:探討醋酸鉛和甲基汞(methyl mercury,MeHg)對臍帶間質干細胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HucMSCs)生物學特性的影響,為鉛對造血系統(tǒng)影響的研究以及汞生殖發(fā)育毒性機制的研究提供新的視角,為毒理學試驗在干細胞水平的研究提供新的思路。
　　 方法:(1)采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)臍帶間質干細胞,取第3—5代用于本實驗。(2)運用MTT法,細胞計數(shù)法檢

2、測醋酸鉛對臍帶間質干細胞增殖的影響,選取60μmol/L作為后續(xù)試驗的作用濃度;流式細胞儀分析醋酸鉛對間質干細胞凋亡以及細胞周期的影響;成骨誘導分為實驗組和對照組,誘導14天后,進行ALP細胞化學染色以及鈣基質染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測ALP基因水平的差異;60μmol/L醋酸鉛作用24,48,72小時后RT-PCR檢測臍帶間質干細胞細胞因子的表達情況;用集落形成實驗來研究醋酸鉛對間質干細胞造血支持作用的

3、影響。(3)用100ppm的醋酸鉛作用SD大鼠建立鉛中毒模型,取大鼠骨髓切片HE染色,觀察醋酸鉛對大鼠骨髓的損傷。(4)運用MTT法檢測甲基汞對臍帶間質干細胞增殖的影響;流式細胞儀分析不同濃度甲基汞對間質干細胞凋亡以及細胞周期的影響;成骨誘導分為實驗組和對照組,誘導14天后,進行ALP細胞化學染色以及鈣基質染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測ALP基因水平的差異。
　　 結果:(1)醋酸鉛作用后會抑制細胞增

4、殖并呈濃度時間依賴性,可以引起細胞凋亡,抑制細胞的成骨分化,并導致臍帶間質干細胞分泌細胞因子的能力下降,體外造血支持作用受到抑制。(2)1000ppm醋酸鉛作用兩個或三個月后,大鼠血鉛水平明顯增高,發(fā)生鉛中毒,大鼠骨髓發(fā)生病理改變。(3)甲基汞作用后導致臍帶間質干細胞增殖能力減低,細胞發(fā)生凋亡,成骨分化能力受到抑制。
　　 結論:(1)醋酸鉛可以抑制臍帶間質干細胞的增殖分化,導致細胞發(fā)生凋亡,分泌的細胞因子表達減低,造血支持作用