重金屬鉛、汞對臍帶間質(zhì)干細胞生物特性的影響.pdf

1、目的:探討醋酸鉛和甲基汞(methyl mercury,MeHg)對臍帶間質(zhì)干細胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HucMSCs)生物學特性的影響,為鉛對造血系統(tǒng)影響的研究以及汞生殖發(fā)育毒性機制的研究提供新的視角,為毒理學試驗在干細胞水平的研究提供新的思路。
　　 方法:(1)采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)臍帶間質(zhì)干細胞,取第3—5代用于本實驗。(2)運用MTT法,細胞計數(shù)法檢

2、測醋酸鉛對臍帶間質(zhì)干細胞增殖的影響,選取60μmol/L作為后續(xù)試驗的作用濃度;流式細胞儀分析醋酸鉛對間質(zhì)干細胞凋亡以及細胞周期的影響;成骨誘導分為實驗組和對照組,誘導14天后,進行ALP細胞化學染色以及鈣基質(zhì)染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測ALP基因水平的差異;60μmol/L醋酸鉛作用24,48,72小時后RT-PCR檢測臍帶間質(zhì)干細胞細胞因子的表達情況;用集落形成實驗來研究醋酸鉛對間質(zhì)干細胞造血支持作用的

3、影響。(3)用100ppm的醋酸鉛作用SD大鼠建立鉛中毒模型,取大鼠骨髓切片HE染色,觀察醋酸鉛對大鼠骨髓的損傷。(4)運用MTT法檢測甲基汞對臍帶間質(zhì)干細胞增殖的影響;流式細胞儀分析不同濃度甲基汞對間質(zhì)干細胞凋亡以及細胞周期的影響;成骨誘導分為實驗組和對照組,誘導14天后,進行ALP細胞化學染色以及鈣基質(zhì)染色(Von Kossa),并提取RNA,RT-PCR檢測ALP基因水平的差異。
　　 結果:(1)醋酸鉛作用后會抑制細胞增

4、殖并呈濃度時間依賴性,可以引起細胞凋亡,抑制細胞的成骨分化,并導致臍帶間質(zhì)干細胞分泌細胞因子的能力下降,體外造血支持作用受到抑制。(2)1000ppm醋酸鉛作用兩個或三個月后,大鼠血鉛水平明顯增高,發(fā)生鉛中毒,大鼠骨髓發(fā)生病理改變。(3)甲基汞作用后導致臍帶間質(zhì)干細胞增殖能力減低,細胞發(fā)生凋亡,成骨分化能力受到抑制。
　　 結論:(1)醋酸鉛可以抑制臍帶間質(zhì)干細胞的增殖分化,導致細胞發(fā)生凋亡,分泌的細胞因子表達減低,造血支持作用