人DNA聚合酶kappa的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文人DNA聚合酶kappa的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究姓名：徐旸申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：胡汛鄭樹2003.5.1塑婆查蘭!!主蘭垡堡塞板插入配對堿基，造成1移碼突變。對某些損傷，pol1c不能進(jìn)行TLS，包括順鉑加成物，胸腺嘧啶TT二聚體等，但是能有效延伸錯配的引物末端。pol1c能夠?qū)(a)P造成的DNA損傷進(jìn)行TLS，在G對面插入c，準(zhǔn)確跨越4種不同構(gòu)象的dG_N2BPDE。盡管如此，大多數(shù)情況下polK主要產(chǎn)

2、生突變。pol1c在肺癌中高表達(dá)，提示pol，c與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性。小鼠polK在睪丸組織中表達(dá)隨發(fā)育過程而變化，它的轉(zhuǎn)錄受AhR調(diào)控。有關(guān)polK在腫瘤中差異表達(dá)的機(jī)制還不清楚。通過本課題的研究，試圖闡明polK的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，有助于我們深入了解p01c在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。1polK在腫瘤中的表達(dá)研究盡管已有研究表明polK在肺癌中表達(dá)增高，但它在其它腫瘤中的表達(dá)情況還不清楚。我們利用熒光實時定量PCR檢測了130對癌和癌旁正常組

3、織中pol1c的表達(dá)情況。在130對組織標(biāo)本中，大腸癌占59例，胃癌48例，肺癌23例。先從組織中提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，作為定量PCR的模板。比較每個標(biāo)本的Ct值，并以GAPDH為內(nèi)對照，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。與以前的結(jié)果不同，我們發(fā)現(xiàn)p01c在肺癌，大腸癌和胃癌組織中均表達(dá)降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義(PO01)。23例肺癌中，有20例pol1c在癌中表達(dá)降低；59例大腸癌中50例比正常組織表達(dá)水平低；48例胃癌中44例pollc表達(dá)降低。

4、pol’c表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤病理類型和分期沒有明顯關(guān)系。Pol’c的差異表達(dá)的原因不清。促使我們對其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制開展研究。25’側(cè)翼區(qū)的克隆21首先我們進(jìn)行了Pollc基因的轉(zhuǎn)錄起始點定位。采用5’eDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)和套式PCR兩種方法。5’RACE利用Takara公司的試劑盒，從提取Hela細(xì)胞總RNA開始按說明操作。套式PCR是以人結(jié)腸組織cDNA文庫來源的7gtlIDNA為模板，進(jìn)行2輪擴(kuò)增。兩種方法得到的